A型肉毒毒素重组抗原的克隆表白及其ELISA检测试剂盒的制备

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A型肉毒毒素重组抗原的克隆表白及其ELISA检测试剂盒的制备

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毕业论文范文题目：A型肉毒毒素重组抗原的克隆表白及其ELISA检测试剂盒的制备，论文范文关键词：A型肉毒毒素重组抗原的克隆表白及其ELISA检测试剂盒的制备
A型肉毒毒素重组抗原的克隆表白及其ELISA检测试剂盒的制备毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：肉毒毒素(Botulinumtoxin)是由肉毒梭菌(Clostridiumbotulinum)产生的一种存在神经毒性的蛋白质外毒素,也称肉毒神经毒素(Botulinumneurotoxin,BoNT),共分A～G7个血清型。BoNT/A、BoNT/B、BoNT/E三型毒素重要引起人类的肉毒中毒,BoNT在构造上可分为两部分:轻链为活性构造域,存在锌依附性金属内肽（略..）酶活性,重链为结合跟转位构造域。目前,BoNT是重要的毒素战剂跟高度危险的生物可怕剂之一。因此发展BoNT重组抗原片段的研究,为研制ELISA检测试剂盒跟疫苗奠定了基本,并存在非常重要的医学跟军事意思。本实验是用重组DNA技巧克隆表白了A型肉毒毒素重组抗原,并利用重组抗原免疫鼠跟兔,制备了鼠单克隆抗体跟兔血清多抗,经过体系的研究,树破了夹心ELISA（略..）诊断试剂盒,此试剂盒重要用于临床上肉毒毒素的检测。本实验成果如下:1.根据密码子简并性原理对其基因序列进行优化,降落基因中的AT含量(73%降至51.8%),去掉大肠杆菌罕见密码子,并引入限度性酶切位点BamHI、HindⅢ,采取重叠PCR方法进行合成。2.将肉毒毒素重组抗原基因插入到表白载体pET-his中,构建重组质粒pET-his,分辨转化到表白宿主菌BL-21(DE3)中,（文章此处忽略..）经IPTG引诱,超声破菌后分别表白的包涵体,并将包涵体蛋白经镍柱亲跟层析纯化。3.以肉毒毒素重组蛋白免疫Balb/c小鼠,制备单克隆抗体,经细胞融合、筛选、克隆后得到三株单抗,其亚型鉴定为IgGl,并测定三株单抗的效价在10~(-4)～10~(-5)之间。特异性反应鉴定抗体只与A型肉毒毒素重组抗原片段反应,而不与B型肉毒毒素、葡萄球菌肠毒素等反应。4.用抗原免疫兔,采取兔血（文章此处忽略..）清多抗,并用辛酸硫酸铵法纯化多抗,纯化后抗体效价在10~(-7)左右,并存在较高的特异性。抗体纯化后,用辣根过氧化物酶标记,其标记率较高。5.用纯化后的单抗作为包被抗体,兔血清多抗作为标记抗体,做成夹心ELISA检测试剂盒,该试剂盒的检测灵敏度为1ng/ml,且特异性强。

以上为本篇毕业论文范文A型肉毒毒素重组抗原的克隆表白及其ELISA检测试剂盒的制备的介绍部分。

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