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P-gp在卵巢癌细胞对紫杉醇耐药中的作用及耐药逆转的研究

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毕业论文范文题目:P-gp在卵巢癌细胞对紫杉醇耐药中的作用及耐药逆转的研究,论文范文关键词:P-gp在卵巢癌细胞对紫杉醇耐药中的作用及耐药逆转的研究
P-gp在卵巢癌细胞对紫杉醇耐药中的作用及耐药逆转的研究毕业论文范文介绍开始:
【论文摘要】:卵巢癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一,严重威胁女性健康。化疗是卵巢癌术后的重要辅助治疗手段,紫杉醇在卵巢癌化疗中占有重要地位。但卵巢癌在经过数个疗程化疗后,肿瘤细胞往往会出现获得性耐药,致使后续化疗失败。因此,如何克服卵巢癌化疗的多药耐药(multidrugresistance,MDR)成为近年来肿瘤临床研究的热点。紫杉醇耐药的机制很多,涉及P-糖蛋白(P-glyco-protein,P-gp)表达的升高,微管β亚基的改变,微管α亚基的改变,凋亡途径改变等。P-gp是多药耐药基因1(multidrugresistancegene1,MDR1)编码的一种跨膜转运蛋白,具有ATP酶活性,能将化疗药物从细胞内泵出,降低细胞内的有效药物浓度而致多药耐药。而P-g(此处忽略..)p又由蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)磷酸化而具有活性。因此,我们培养了对紫杉醇耐药的卵巢癌细胞A2780/Taxol,研究其P-gp及PKC的表达,观察使用PKC抑制剂和激动剂后P-gp表达量及功能的变化,同时应用RNAi技术沉默P-gp的表达并观察沉默后的耐药细胞内药物蓄积的浓度,为逆转耐药提供依据。目的:1.培养对紫杉醇耐药的卵巢癌细胞A2780/Taxol,研究其表面P-gp及PKC-α的表达;2.观察使用PCK抑制剂SP和激动剂PMA后A2780/Taxol细胞表面P-gp表达量及功能的变化;3.应用RNAi沉默A2780/Taxol细胞MDR1基因,下调其表面P-gp的表达并观察沉默后的耐药细胞内药物蓄积的浓度,明确沉默MDR1基因后表达后能否逆转耐药(略..)。方法:1.免疫细胞化学及免疫荧光双标检测PKC-α与P-gp在耐药细胞A2780/Taxol及其亲本细胞中的表达;2.Westernblot检测并半定量分析PKC激动剂PMA和抑制剂SP作用后P-gp在两种细胞上的表达水平;3.以R123作为荧光探针,采用流式细胞仪检测PMA及SP对细胞内药物浓度的影响;4.构建RNAiMDR1真核表达载体,经脂质体转染至A2780/Taxol细胞,Westernblot检测P-gp沉默效果,MTT法绘制生长曲线,并按方法3检测细胞内药物蓄积浓度。结果:1.免疫细胞化学结果表明在A2780/Taxol中,P-gp与PKC表达均呈阳性,而在亲本细胞中,P-gp不表达,PKC呈阳性表达。免疫荧光双标结果显示在A2780/Taxol中PKC-α与P-gp有共(略..)表达。2.SP及PMA作用后,A2780/Taxol细胞中P-gp的表达量无明显差别。3.PMA作用后A2780/Taxol细胞内R123的平均荧光强度减低,SP作用后,A2780/Taxol细胞内R123的平均荧光强度明显增加。敏感细胞A2780则无此现象。4.成功构建RNAiMDR1真核表达载体,转染至A2780/Taxol细胞,G418筛选,成功获得阳性克隆株。5.MTT结果提示转染后的各组细胞生长曲线无明显差别。Westerblot结果显示A2780/Taxol细胞MDR1基因被特异沉默了,但是针对不同部位序列的shRNA真核表达载体抑制效率不同,R123外排实验结果显示转染后的A2780/Taxol/pWH1-MDR12细胞内药物蓄积浓度明显大于A2780/Taxol细胞。结论:1.卵巢癌细胞A2780对紫杉醇耐药性产生与P-gp过表达有关(本文此处忽略..);2.PKC活性的改变并不能改变A2780/Taxol细胞P-gp的表达量,但是可以通过使P-gp磷酸化增强或减弱来增高或降低其跨膜转运功能;3.RNAi技术特异性沉默A2780/Taxol细胞MDR1的表达后,细胞内药物蓄积浓度明显增高。4.采用PKC抑制剂抑制A2780/Taxol细胞P-gp的功能或利用RNAi技术降低其表面P-gp的表达可以增加细胞内药物的蓄积量,在一定程度上起到逆转耐药的作用。


以上为本篇毕业论文范文P-gp在卵巢癌细胞对紫杉醇耐药中的作用及耐药逆转的研究的介绍部分。
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