BIG-3基因的克隆、表达及其促成骨活性的研究

搜索高级搜索

原创毕业论文

BIG-3基因的克隆、表达及其促成骨活性的研究

作者: 浏览:4次

免费专业论文
政治工作论文
计算机论文
营销专业论文
工程管理论文范文
医药医学论文范文
法律论文范文
生物专业论文
物理教学论文范文
人力资源论文范文
化学教学论文范文
电子专业论文范文
历史专业论文
电气工程论文
社会学专业论文
英语专业论文
行政管理论文范文
语文专业论文
电子商务论文范文
焊工钳工技师论文
社科文学论文
教育论文范文
数学论文范文
物流论文范文
建筑专业论文
食品专业论文
财务管理论文范文
工商管理论文范文
会计专业论文范文
专业论文格式
化工材料专业论文
英语教学专业论文
电子通信论文范文
旅游管理论文范文
环境科学专业论文
经济论文
人力资源论文范文
营销专业论文范文
财务管理论文范文
物流论文范文
财务会计论文范文
数学教育论文范文
数学与应用数学论文
电子商务论文范文
法律专业论文范文
工商管理论文范文
汉语言文学论文
计算机专业论文
环境艺术专业论文
信息计算科学专业
物流专业论文范文
人力资源论文范文
教育管理论文范文
现代教育技术论文
小学教育论文范文
机械模具专业论文
报告,总结,申请书
理工科专业论文
心理学论文范文
学前教育论文范文

毕业论文范文题目：BIG-3基因的克隆、表达及其促成骨活性的研究，论文范文关键词：BIG-3基因的克隆、表达及其促成骨活性的研究
BIG-3基因的克隆、表达及其促成骨活性的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：BIG-3(BMP-2inducedgene3Kb)是FrancescaGori等用BMP-2刺激鼠源软骨前体细胞系MLB13MYC，利用差异PCR方法克隆发现的基因，是BMP信号传导通路上的一个靶基因。用BIG-3基因转染MC3T3细胞发现碱性磷酸酶的表达早于空载体，并且在14天时达到10倍于空载体的峰值。BIG-3的表达促进Cbfal，Ⅰ型胶原，骨钙素的分泌和骨小梁的矿化。BIG-3编码一含有328个氨基酸、分子量约34kDa的蛋白，此蛋白属高度保守的WD-40重复序列蛋白家族的一员。WD-40重复序列蛋白目前仅被发现存在于所有的真核生物中，广泛参与多种分子功能，如信号转导、mRNA的加工、基因的调（此处忽略..）控及细胞周期等。BIG-3在体外加速软骨细胞的分化和成熟，在小鼠胚胎发育期BIG-3的表达，表明BIG-3可能是软骨细胞分化和增生肥大的调节因子。同时，BIG-3在成骨细胞中表达并能加速成骨细胞的分化，表明BIG-3蛋白参与体内软骨内骨形成过程。一．本组实验首先采用生物软件分析了小鼠和人BIG-3基因全长编码序列的同源性和序列的一致性，结果表明，二者序列同源性为99.9％，序列一致性为87.7％，在进化上高度保守。同时分析了其氨基酸序列的同源性和一致性，结果表明，二者氨基酸序列的同源性和一致性均为100％。二．使用Genbank检索BIG-3基因序列，根据引物设计原则设计引物并交由上（略..）海生工生物工程技术服务有限公司合成；从新生小鼠颅骨中提取总RNA，经RT-PCR得到全长BIG-3产物；将载体和PCR产第四军医大学硕士学位论文物双酶切，经连接反应后转化感受态细胞，筛选阳性克隆，构建原核表达载体并对重组子pGEX一4T一2--BIG·3进行序列测定。结果显示所得的目的基因的序列与从GenBank中检索到的序列完全一致。三.重组子pGEX一4T一2一BIG一3转化BLZI菌株后经lP丁G诱导在6OkDa处出现新生表达带，与预期分子量相符。用IPTG诱导IL收集细菌，超声裂菌，离心，弃上清，沉淀用SM尿素变性后梯度稀释复性，在尿素浓度达ZM时使用亲和层析（本文此处忽略..）柱S即harose4B纯化表达产物，取电泳样品行SDS一队GE，证实得到高纯度GST-BIG一3融合蛋白。四.用纯化的GST-BIG一3蛋白免疫兔，制备多克隆抗体，用双向免疫扩散试验测定多克隆抗体的效价，westemboh鉴定其特异性。结果制备了效价为1:128的多克隆抗体，且具有较高的特异性。五.制备pMSCvpuro一BIG一3质粒，复苏冻存的PT67细胞，待pT67细胞达80%汇合时，进行pMSCVpuro一BIG一3转染，制备重组BIG一3逆转录病毒，PCR法进行鉴定证实成功获得携带BIG一3的重组逆转录病毒。六.将对数生长期的人骨髓基质干细胞传代至12孔板中，待细胞达60%汇合时向培养液（略..）中加入含重组BIG一3逆转录病毒的细胞培养上清200pl，一周后，使用含5pg/ml嗓罗霉素的完全培养液进行筛选，待细胞爬满后，行碱性磷酸酶染色与钙结节染色，结果显示两种染色均呈强阳性。综上所述，我们成功克隆了小鼠BIG一3基因并构建了原核表达载体，在此基础上表达并纯化了BIG一3蛋白，同时制备了效价较高、特异性明显的BIG一3蛋白的多克隆抗体:初步的的生物学功能研究表明BIG一3均有较高的促成骨作用。

以上为本篇毕业论文范文BIG-3基因的克隆、表达及其促成骨活性的研究的介绍部分。

本论文在医药医学论文栏目，由论文网(www.zjwd.net)整理,更多论文,请点论文范文查找

收费专业论文
汉语言文学论文
物理学论文
自动化专业论文
测控技术专业论文
历史学专业论文
机械模具专业论文
金融专业论文
电子通信专业论文
材料科学专业论文
英语专业论文
会计专业论文
行政管理专业论文
财务管理专业论文
电子商务国贸专业
法律专业论文
教育技术学专业论文
物流专业论文
人力资源专业论文
生物工程专业论文
市场营销专业论文
土木工程专业论文
化学工程专业论文
文化产业管理论文
工商管理专业论文
护理专业论文
数学教育专业论文
数学与应用数学专业
心理学专业论文
信息管理专业论文
工程管理专业论文
工业工程专业论文
制药工程专业论文
电子机电信息论文
现代教育技术专业
新闻专业论文
热能与动力设计论文
教育管理专业论文
日语专业论文
德语专业论文
轻化工程专业论文
社会工作专业论文
乡镇企业管理
给水排水专业
服装设计专业论文
电视制片管理专业
旅游管理专业论文
物业管理专业论文
信息管理专业论文
包装工程专业论文
印刷工程专业论文
动画专业论文
营销专业论文范文
工商管理论文范文
汉语言文学论文范文
法律专业论文范文
教育管理论文范文
小学教育论文范文
学前教育论文范文
财务会计论文范文

电子商务论文范文

上一篇：基于数值模拟的矿井提升机主轴疲..

下一篇：乐至黑山羊GH、IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ基..