秸秆纤维素高效降解真菌的筛选、鉴定及其纤维素酶基因克隆

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秸秆纤维素高效降解真菌的筛选、鉴定及其纤维素酶基因克隆

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毕业论文范文题目：秸秆纤维素高效降解真菌的筛选、鉴定及其纤维素酶基因克隆，论文范文关键词：秸秆纤维素高效降解真菌的筛选、鉴定及其纤维素酶基因克隆
秸秆纤维素高效降解真菌的筛选、鉴定及其纤维素酶基因克隆毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：我国每年的作物秸秆产出量约6.5亿吨,折合纤维素含量约2亿多吨,是自然界藴藏最丰富的可再生资源。但是作物秸秆由于组成成分结构的复杂性,不易降解已经成为生产中的障碍,特别在以种植业为主的地区,秸秆在短期内的不易腐解,加上直接还田影响墒情和耕作,导致废弃和焚烧秸秆遍及广大农村,由此引起环境污染和严重的资源浪费,获取高效降秸秆纤维素的微生物菌株及其制剂的应用是解决我国严峻秸秆问题技术的关键。本文进行了秸秆降解微生物的研究,取得了以下主要结果:利用稀释涂平板法从300个来自吉林,浙江,四川,河北,北京等地的土壤样品中初筛到360株秸秆纤维素降解菌,依据降解菌在平板上降解圈的大小,得到5株降解能力较强的真菌,分别命名为T1,HD5,HD6,HD7和HD24。这5株真菌均能以秸秆纤维素为唯一碳源良好生长。通过形态观察、18SrDNA序列分析和ITS序列分析鉴定这5株菌分别属于肉座菌属的Hypocrealixii(Trichodermaharzianum)、曲霉属的黄曲霉(Aspergillusflavus)、曲霉属的烟曲霉(Aspergillusfumigatus)、木霉属的Trich（此处忽略..）odermakoningiopsis和青霉属的草酸青霉(Penicilliumoxalicum)。纤维素降解菌株HypocrealixiiT1,AspergillusflavusHD5,AspergillusfumigatusHD6,TrichodermakoningiopsisHD7和PenicilliumoxalicumHD24在固体平板上和液体培养基中都有很好的降解效果。在固体平板上,秸秆纤维素的添加量为1%时,HypocrealixiiT1,AspergillusflavusHD5,AspergillusfumigatusHD6,TrichodermakoningiopsisHD7和PenicilliumoxalicumHD2430℃培养7d,固体平板中央出现明显的降解透明圈,为20-25mm不等。在液体培养基中,HypocrealixiiT1,AspergillusflavusHD5,AspergillusfumigatusHD6,TrichodermakoningiopsisHD7和PenicilliumoxalicumHD24在第3d全酶活(FPA)均达到最大,其FPA的（略..）最大酶活力分别为25.4U,34.36U,28.85U,31.19U,32.05U,比标准菌株Trichodermaviride(AS3.3711)的酶活力分别高出21.88%,64.87%,38.43%,49.66%,53.79%。它们的最适反应温度均为50℃,但是菌株间产酶的pH值存在差异,菌株T1,HD5,HD6的最适pH值为5,菌株HD7的最适pH值为5.5,而菌株HD24的最适pH值为6。不同的氮源及其用量影响菌株降解纤维素的FPA活性,确定了菌株最佳的氮源种类及其用量:HypocrealixiiT1的最佳氮源为NaNO_3,添加量为1.5%;AspergillusflavusHD5的最佳氮源为(NH_4)_2SO_4,添加量为2%;AspergillusfumigatusHD6的最佳氮源为(NH_4)_2SO_4,添加量为0.5%;TrichodermakoningiopsisHD7的最佳氮源为(NH_4)_2SO_4,添加量为1.5%;PenicilliumoxalicumHD24的最佳氮源为(NH_2)_2CO添加量为1%。添加0.1%蔗糖对菌株降解纤维素的FPA活性均呈现抑制作用,而添加0.1%的纤维二糖只对HypocrealixiiT1,AspergillusflavusHD5,Aspergillusfumigatus（文章此处忽略..）HD6,TrichodermakoningiopsisHD7的FPA活性表现了一定的抑制效应,明显提高PenicilliumoxalicumHD24的FPA活性;添加0.1%的Tween20对HypocrealixiiT1,AspergillusfumigatusHD6和TrichodermakoningiopsisHD7的FPA活性促进作用不明显,但显著提高了AspergillusflavusHD5和PenicilliumoxalicumHD24的FPA活性。利用SMARTcDNAlibraryConstruction技术,构建了HypocrealixiiT1,AspergillusfumigatusHD6和TrichodermakoningiopsisHD7的cDNA文库:通过抽提总RNA,经反转录合成cDNA第一链,PCR合成第二链,制备了cDNA的全长片段,收集500bp以上的片段,与λTriplE载体重组,其库容量均达到10~9pfu/mL,重组载体经体外包装、转染E.coliLE392,在Amp+的抗性培养基上获得10万多个λ噬菌斑。利用纤维素底物诱导,筛选到了携带纤（略..）维素外切酶和内切酶基因的目的克隆子320个,挑选其中45个阳性克隆子,经PCR扩增测序和比对,获得3个新的纤维素酶基因。采用双向凝胶电泳(2DE)技术,研究了在相同培养条件下TrichodermavirideAS3.3711,AspergillusfumigatusHD6,TrichodermakoningiopsisHD7和PenicilliumoxalicumHD24的蛋白组学,结果表明纤维素酶的活性与其蛋白质的表达密切相关,这些菌株的2DE图谱之间也存在明显的差异,推测这些差异表达的蛋白质点可能与纤维素酶的种类、活性有关。

以上为本篇毕业论文范文秸秆纤维素高效降解真菌的筛选、鉴定及其纤维素酶基因克隆的介绍部分。

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