黑曲霉植酸酶基因的克隆、定点突变及高效表达

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黑曲霉植酸酶基因的克隆、定点突变及高效表达

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毕业论文范文题目：黑曲霉植酸酶基因的克隆、定点突变及高效表达，论文范文关键词：黑曲霉植酸酶基因的克隆、定点突变及高效表达
黑曲霉植酸酶基因的克隆、定点突变及高效表达毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：植酸酶作为一种重要的饲料添加剂和未来的食品添加剂,具有广阔的应用前景。但微生物分泌的植酸酶活力低是制约其的主要障碍。因此,研究和开发高活力植酸酶的制备技术意义重大。本研究在直接利用黑曲霉菌株NL-1制备植酸酶的基础上,对该菌株的植酸酶基因进行了克隆、定点突变,以及诱导表达条件的优化。主要结果如下:(1)以黑曲（此处忽略..）霉NL-1基因组DNA为模板,利用PCR技术成功克隆了黑曲霉NL-1植酸酶基因片段,大小约1,500bp。该序列与GenBank中已登录的黑曲霉植酸酶序列AY426977进行比对,核苷酸编码序列同源性为98.75%。(2)成功构建了毕赤酵母融合表达质粒pPICZαA-PhyA。采用电转化法将构建的表达质粒导入毕赤酵母GS115,筛选获得优良的转化（此处忽略..）子。诱导表达的结果表明,植酸酶基因在毕赤酵母中实现了较高水平的表达。适宜条件下,植酸酶的表达量为出发菌株的223倍。并首次从黑曲霉中克隆获得中性植酸酶。(3)在诱导产酶过程中,适宜的甲醇添加量为1%,适宜的甲醇添加时间为每隔36h添加1次,较佳的诱导产酶培养基为75%BMMY+25%麦芽汁。该条件下培养96h后酶活力可达到142.82U/mL。(4)植酸（本文此处忽略..）酶最适反应温度、pH分别为50℃和5.0-7.0,在温度低于70℃、pH值为3.0-7.0范围内均能保持较好的稳定性。金属离子对植酸酶的活性也具有一定程度的影响。(5)在不改变氨基酸序列的情况下,对植酸酶基因序列中部分编码Arg的密码子进行同义突变,分别构建了3点和6点突变后的两种重组质粒,并成功转化到毕赤酵母GS115。通过筛选获得了表达（略..）量较高的重组菌。其中,六点突变的重组菌诱导表达5天后酶活力达到最高值149.31U/mL,比酶活为21.52U/mg,为突变前重组酵母的1.61倍。

以上为本篇毕业论文范文黑曲霉植酸酶基因的克隆、定点突变及高效表达的介绍部分。

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