基于IgY的日本血吸虫轮回抗原检测技巧研究

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基于IgY的日本血吸虫轮回抗原检测技巧研究

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毕业论文范文题目：基于IgY的日本血吸虫轮回抗原检测技巧研究，论文范文关键词：基于IgY的日本血吸虫轮回抗原检测技巧研究
基于IgY的日本血吸虫轮回抗原检测技巧研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：血吸虫病是一种广泛风行于热带跟亚热带地区的人兽共患寄生虫病,寰球76个国度跟地区的约2亿人口受感染,有6亿人口受感染威胁。在我国,曾风行于长江流域及其以南的12个省、市、自治区,目前虽已有5个省市区阻断了传播,仍有7个省有血吸虫病的风行,血吸虫病的防治工作在我国仍然面临着严格的挑衅。诊断是血吸虫病防治工作的核心环节,当前虽仍以病原检查作为血吸虫病诊断的金标准,但跟着防治工作的始终深刻,人群感染率及感染度始终降落,病原学检查越来越艰苦,病人的依从性也越来越低,人们号召疾速、敏感、正确的免疫学诊断方法的呈现。轮回抗体检测,虽有较好的敏感性、特异性,但因为医治后轮回抗体仍在体内存留若干年,因此无奈辨别现症感染与既往感染,以及无奈进行疗效考察。轮回抗原检测,则可反应机体活动性感染的存在与否,并具疗效考察价值,但目前所研制的以哺乳动物特异性单、多抗作为捕获抗体的检测技巧仍存在敏感性不高、特异性不强、穿插反应重大等不足。因此,须要寻求新的轮回抗原检测方法或捕获抗体调换品。鸡卵黄免疫球蛋白(eggyolkimmuno-globulin,IgY)是鸟类、两栖类跟爬行类动物重要的免疫球蛋白,在功能上等同于哺乳动物的IgG,而又存在较多不同于哺乳动物IgG的特点,在医学范畴已经得到广泛利用,并已显示出其医治、诊断的潜能。为此,本研究旨在探讨IgY在血吸虫病轮回抗原检测中利用的可能性及其价值。1.制备抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的特异性鸡卵黄免疫球蛋白(IgY),对比察看两种道路免疫鸡产生抗SEA特异性IgY抗体程度动态变更；2.树破基于IgY的检测日本血吸虫轮回抗原的双抗体夹心法-ELISA(S-ELISA)及胶体金免疫层析试（略..）条法,初步探讨IgY在日本血吸虫病诊断中的价值。目标：制备抗SEA特异性IgY抗体并对其进行初步鉴定。方法：七只新西兰兔感染日本血吸虫尾蚴(1500条/只)42d后解剖收集虫卵,制备SEA。将SEA分辨经皮下跟静脉打针免疫健康海蓝蛋鸡(3只/组),首次跟第2次免疫间隔2周,之后每次间隔4周,共免疫5次,50μg/(只·次)。取三份雷同体积的卵黄原液,用(PH5.0-5.2)的双蒸水作1：6、1：8、1：10稀释,充分搅拌,采取不冻融或冻融一次、两次后离心,取上清,再稀释至卵黄原液体积；分光光度计测IgY抗体浓度,琼脂糖双扩散法检测IgY抗体效价。将IgY粗提液再经硫酸铵盐析法提纯；再取同批卵黄原液用IgY纯化试剂盒纯化,ELISA法测定不同纯化方法所得抗体效价。SDS-PAGE跟Westernblotting分析IgY抗体特点。成果：用双蒸水对卵黄作1：8稀释,冻融两次获得的IgY浓度最高。经间接ELISA法测定水稀释法获得IgY抗体效价为1：25600,试剂盒法提纯的IgY效价为1：12800。经SDS-PAGE分析,试剂盒法纯化后的IgY在绝对分子品质(Mr)68000跟25000处各有一条清楚条带,而水稀释法提纯后还有其余两条带存在。Westernblotting分析免疫后IgY可与SEA产生特异性反应。论断：成功制备并鉴定特异性抗SEAIgY抗体,为进一步探讨IgY抗体在血吸虫病中的诊断价值奠定了基本。目标：察看不同免疫道路产生抗日本血吸虫SEA抗原特异性IgY抗体程度动态变更方法：将SEA分辨经皮下跟静脉打针免疫健康海蓝蛋鸡(3只/组),首次跟第2次免疫间隔2周,之后每次间隔4周,共免疫5次,50μg/(只·次)。收集免疫后的鸡蛋做好标记,4℃保存备用。取皮下组跟静脉组免疫后2、4、6……18周的鸡蛋,按最佳水稀释法（略..）流程制备IgY粗提液,琼脂糖双扩散法检测抗体首次产生时光,间接ELISA法测定不同免疫方法IgY动态变更。成果：静脉打针组跟皮下打针组都在首次免疫后一周产生抗体,而分辨在第8跟12周IgY抗体程度达顶峰,随后静脉打针组抗体程度至第18周仍保持较高程度,而皮下打针组抗体程度达到峰值后逐步降落。经ELISA测得静脉打针组峰值程度抗体效价1：51200,皮下打针组峰值程度抗体效价为1：25600。论断：本研究初步阐明了特异性抗日本血吸虫SEA-IgY产生的动态变更法则,为制备高效价特异性IgY提供了实际及实验根据。目标：树破一种双抗体夹心法(S-ELISA)来检测日本血吸虫轮回抗原,初步探讨IgY在诊断日本血吸虫病中的利用价值。方法：分辨用10、20、40、80μg/ml的抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的IgY抗体包板,脱脂奶粉封闭,参加0.2μg/μL的SEA抗原,洗涤后分辨参加1：2000、1：1000、1：500稀释的酶标HRP-IgM单抗,断定最佳捕获抗体浓度跟最佳酶标抗体工作浓度。将血吸虫病患者血清跟畸形人血清分辨稀释为1：10、1：5跟原液,以断定最佳稀释度。根据断定的最佳工作前提,用双抗夹心ELISA法察看日本血吸虫急、慢性病人血清,畸形人血清跟其余寄生虫病人血清的检测后果。成果：本研究断定了双抗夹心ELISA法最佳工作前提：最佳酶标抗体工作浓度为1：500,最佳IgY抗体包被浓度为40μg/ml,最佳血清稀释度为1：5。SEA抗原最低检测量为300ng/ml。检测急性、慢性血吸虫病人血清阳性率分辨为100%(20/20)跟91.3%(21/23),检测畸形人血清特异性为95%(38/40),除与卫氏并殖吸虫、囊虫病人血清存在少量穿插反应外,与其余寄生虫无穿插反应。论断：树破了基于IgY的双抗体夹心ELISA法,断定了最佳工作前提,此法检测日（此处忽略..）本血吸虫病轮回抗原存在较高的敏感性跟特异性。目标：树破基于IgY的检测日本血吸虫轮回抗原胶体金免疫层析法,断定捕获抗体及金标结合物最佳组合。方法：采取柠檬酸盐还原法制备的胶体金颗粒标记特异性抗体,将金标抗体喷点在玻璃纤维膜上制备金标垫；将抗血吸虫单抗跟抗鼠或抗鸡IgG喷点于硝酸纤维素膜(NC膜)上,作为检测线(T线)跟质控线(C线)。将该NC膜与金标结合物垫、样品垫、PVC板制成金标检测层析试纸条,将抗日本血吸虫SEA的单克隆抗体IgM、IgG1、IgG2b跟鸡多克隆抗体IgY分辨作为捕获抗体跟金标抗体,配对组合检测,察看不同抗体组合对的检测后果。成果：在众多组合中,以单抗IgG1(1.5mg/mL)为捕获抗体,以IgY为金标抗体(30%)的组合后果最佳,对急、慢性血清都能检出,对畸形人血清也无非特异反应。论断：初步树破了基于IgY的检测日本血吸虫轮回抗原金标免疫层析试条法,以1.5mg/mL的IgG1跟30%金标IgY为捕获抗体及金标结合物的组合检测后果最好。1.用日本血吸虫SEA抗原分辨经静脉打针及皮下打针免疫海蓝蛋鸡,收集鸡蛋,采取水稀释法、饱跟硫酸铵法及IgY纯化试剂盒法提取纯化鸡卵黄IgY抗体。成果以水稀释法提取获得IgY抗体量最高,抗体蛋白浓度达6.5-9.Omg/ml。SDS-PAGE分析显示,试剂盒纯化后的IgY纯度最高,IgY有二条分子量为68kDa跟25kDa条带；Westernblotting鉴定显示,所获抗SEA-IgY抗体可与SEA产生特异性反应。2.取皮下打针及静脉打针免疫后2-18周的鸡蛋,以水稀释法提取IgY抗体,间接ELISA法测定IgY动态变更。静脉打针组跟皮下打针组分辨在首次免疫后第8跟12周IgY抗体程度达顶峰,静脉（文章此处忽略..）打针组IgY至第18周仍保持较高程度,而皮下打针组抗体程度达到峰值后随之降落。本研究初步阐明了特异性抗日本血吸虫SEA-IgY产生的动态变更法则。3.以抗SEA-IgY为捕获抗体,HRP标记抗SEA单抗IgM为酶标结合物,树破了基于IgY的双抗体夹心ELISA法,断定了包被抗体量、酶结合物工作浓度及血清最佳稀释度。对SEA抗原最低检测浓度是300ng/ml。检测急性、慢性血吸虫病人血清阳性率分辨为100%(20/20)跟91.3%(21/23),40份畸形人血清特异性为95%,除与卫氏并殖吸虫、囊尾蚴病人血清存在少量穿插反应外,与其余寄生虫无穿插反应。成果显示,此法检测日本血吸虫病轮回抗原存在较高敏感性跟特异性。4.以抗SEA的单抗IgM、IgG1、IgG2b跟鸡多抗IgY作为捕获抗体及金标结合物进行配对组合,抉择最佳检测组合对,树破基于IgY的检测血吸虫轮回抗原的胶体金免疫层析试条。成果显示,以1.5mg/mL浓度的IgG1单抗跟30%金标IgY分辨作捕获抗体及金标结合物的检测后果最好,对急、慢性血清都能检出,对畸形人血清也无非特异反应。

以上为本篇毕业论文范文基于IgY的日本血吸虫轮回抗原检测技巧研究的介绍部分。

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