猪感染性胃肠炎病毒S基因乳腺特异性真核表白载体构建的研究

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猪感染性胃肠炎病毒S基因乳腺特异性真核表白载体构建的研究

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毕业论文范文题目：猪感染性胃肠炎病毒S基因乳腺特异性真核表白载体构建的研究，论文范文关键词：猪感染性胃肠炎病毒S基因乳腺特异性真核表白载体构建的研究
猪感染性胃肠炎病毒S基因乳腺特异性真核表白载体构建的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：猪感染性胃肠炎（SwineTransmissiblegastroenteritis,TGE）是由冠状病毒科冠状病毒属中的猪感染性胃肠炎病毒（Transmissiblegastroenteritisvirus,TGEV）引起的高度感染性肠道疾病，重要临床症状是呕吐、重大腹泻跟脱水，各种年纪及品种的猪对本病均易感，尤其对新生仔猪致逝世率可达100％。目前，防治该病的最有效手段是接种疫苗。惯例疫苗包含弱毒疫苗跟灭活疫苗，但它们在必定程度上存在着排毒、散毒、毒力返祖、免疫后（略..）果差等缺点，故免疫后果不够幻想，因此，亟需研制一种高效、保险的基因工程疫苗来从基本上防治TGE。本研究着眼于乳腺生物反应器出产药用蛋白存在保险、高效、本钱低廉的长处，利用TGEV保护性抗原编码蛋白S基因、β－酪蛋白启动子跟表白载体pEGFP-C1构建了TGEV真核表白质粒即基因疫苗。研究内容如下：1.本研究根据TGEV抗原编码蛋白S基因核酸序列，利用引物设计软件Primer5.0设计了5条引物，通过RT-PCR方法直接从含有TGEV的猪肠管组织中分段克隆2127bpS1片段跟2450bp（略..）S2片段，经酶切鉴定后，分辨克隆至pMD－Tvector，筛选阳性重组子pMD-S1跟pMD-S2，穿刺培养送交测序，核酸序列分析证明与不同毒株雷同序列同源性均达94％以上。S13′端跟S25′端存在81bp的重叠区，因此以S1跟S2的混淆物为模板，TS1跟TS2为引物，重组PCR扩增出4496bpS基因全长序列，将其克隆至pGEM-Teasyvector，酶切及PCR分析证明S基因全长序列克隆成功。2.根据表白载体pEGFP-C1上的多克隆位点及重组质粒pG-BBCP中β－酪蛋白启动子序列，设计合成（此处忽略..）引物TS1′跟TA2′，即在引物TS15′端增加限度性内切酶NheⅠ酶切位点，引物TA25′端增加限度性内切酶BamHⅠ酶切位点，利用该对引物从质粒pGEM-S上扩增S′基因，酶切鉴定PCR回收产物，而后将其克隆到pGEM-Teasyvector，酶切鉴定重组质粒pGEM－S′，NheⅠ跟BamHⅠ酶切pGEM－S′并定向克隆至质粒pG-BBCP相应位点，酶切鉴定重组质粒。SacⅠ跟MluⅠ双酶切重组质粒，回收BCP－S′，并在T4DNA连接酶作用下与pEGFP-C1定向连接（本文此处忽略..），酶切及PCR鉴定，分析表明TGEV乳腺特异性表白质粒（即基因疫苗）构建成功。该载体含有强启动子（人巨细胞病毒CMV），报告基因（加强型绿色荧光蛋白EGFP），抗性筛选基因（新霉素基因neor），β－酪蛋白的启动子（2.2kb5′调控成分跟0.6kb3′端polyA加尾信号）及目标基因TGEVS基因。为进一步研究TGEV核酸疫苗免疫机制的可行性奠定了坚实的基本。

以上为本篇毕业论文范文猪感染性胃肠炎病毒S基因乳腺特异性真核表白载体构建的研究的介绍部分。

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