牛传染性鼻气管炎病毒gB单克隆抗体的制备与阻断ELISA检测方法的

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牛传染性鼻气管炎病毒gB单克隆抗体的制备与阻断ELISA检测方法的

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牛传染性鼻气管炎病毒gB单克隆抗体的制备与阻断ELISA检测方法的毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：牛传染性鼻气管炎病毒(Infectiousbovinerhinotracheitisvirus,IBRV)具有广泛的嗜组织性,能侵害牛的多种组织和器官而表现不同的临床型,如呼吸道型、生殖道型、脑膜炎型等。当病毒侵入动物体内以后潜伏于一定部位在机体抵抗力较低时又能向外排毒,对全世界的养牛业造成很大威胁。本病最先发现于1955年美国科罗拉多州的育肥牛群,随后在很多国家陆续有该病的报道,（略..）20世纪80年随着进境牛传入我国。目前,国内还没有标准的检测方法,IBR的诊断主要依赖于国外昂贵的试剂盒,所以需要开发出能准确诊断IBR的新产品。IBRV基因组能编码11种糖蛋白,其中gB蛋白是病毒囊膜表面展示的主要蛋白之一也是主要的免疫原蛋白,在病毒致病过程和刺激机体产生抗体的过程中均起到较大的作用,由于gB蛋白能产生保护性中和抗体引发许多研究者对其在本病的诊断方法方面做了大量研（略..）究。本研究通过牛肾细胞(MDBK)对IBRV进行增殖培养,利用蔗糖梯度离心提纯后应用BCA试剂盒测定蛋白含量为5.7083mg/ml,TCID50为10-5.33/0.1ml,并用PCR法进行检测,结果证明获得了较高纯度的IBRV。用纯化的全病毒与弗氏佐剂混合免疫BALB/C小鼠3次,重组IBRVgB蛋白加强免疫一次,最终阳性血清效价均达到1：12800以上,说明小鼠免疫效果较好可以用于融合。利用50%的PEG4000做融合剂,（此处忽略..）将免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,在6次融合实验中有3次融合率超过70%,融合率较高。经过筛选获得了一株抗IBRVgB的单克隆抗体2C4,利用亲和层析法对其进行了提纯,测定蛋白含量为3.647mg/ml,腹水效价为1：12800,SDS-PAGE电泳及Western-bolt分析及特异性试验证明具有较高的特异性。利用该单克隆抗体作为阻断ELISA的检测抗体确立了阻断ELISA检测方法,具体工作浓度为：g（略..）B蛋白3.603μg/ml、单抗9.116μg/ml。对三种牛的多发病原体的阳性血清及IBR阳性血清进行了检测,结果与间接ELISA检测结果相符,证明此法具有良好的特异性及敏感性,适用于IBR的诊断及流行病学调查,为该病的监控提供了一种有效的方法。

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