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猪传染性胃肠炎M基因的克隆及序列分析

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毕业论文范文题目：猪传染性胃肠炎M基因的克隆及序列分析，论文范文关键词：猪传染性胃肠炎M基因的克隆及序列分析
猪传染性胃肠炎M基因的克隆及序列分析毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：猪传染性胃肠炎病毒(TransmissibleGastroenteritisVirus,TGEV)属于冠状病毒科冠状病毒属，其可导致猪传染性胃肠炎。对养猪业危害性极大。抗毒素和抗生素等常规药物对本病无任何治疗作用，预防该病的有效方法是疫苗接种。本研究以猪传染性胃肠炎病毒感染的乳猪小肠病料为材料，自行设计两对引物，通过套式（RT-nested）PCR及普通的RT-PCR扩增出猪传染性胃肠炎病毒M基因全（此处忽略..）序列，经测序、同源性比较后，进行深入的分析，主要研究结果如下：1．本试验以乳猪小肠组织病料为材料，用Trizol法提取总RNA，经甲醛凝胶变性电泳，能清晰的看到28s、18srRNA两条亮带以及一条较弱的5srRNA带。结果表明，所提取的RNA完整性好，没有发生降解，完全可以用于RT-PCR反应。2．根据GeneBank中发表的猪传染性胃肠炎病毒M基因序列，利用软件设计两对引物（外引物和内引物），在普通的RT（本文此处忽略..）-PCR方法基础上，建立了RT-nestedPCR体系，扩增出猪传染性胃肠炎病毒M基因的全序列，使用内外引物扩增的片段长度分别为1037bp、1328bp。结果表明，用双引物的RT-nestedPCR较普通的RT-PCR扩增方法更具特异性，重复性好，能很好的避免病毒检测时假阳性的出现。且较传统的方法如电镜技术、免疫荧光技术、ELISA等更方便可靠，完全可以作为一种新型的、特异性强的病毒检测的方法。3．利用RT-P（此处忽略..）CR方法，扩增出猪传染性胃肠炎病毒M基因全序列，长度为1328bp，扩增产物经回收、转化,克隆在pGEM-TEasy载体的T位点上。用EcoRⅠ酶切鉴定重组质粒DNA，挑选出阳性克隆菌，进行序列测定后。利用CLUSTAL（1.82）软件进行同源性分析。结果显示，扩增的猪传染性胃肠炎病毒M基因序列与GeneBank中登录号为AY587883和AF302262的猪传染性胃肠炎病毒M基因的核苷酸序列同源性分别为97.2%，97.3%。氨基酸同源性分别为97.（文章此处忽略..）3%，98.0％。软件分析表明，各有22处和21处碱基发生了突变，其中一处碱基发生了缺失，7个和5个氨基酸发生了转换。本研究不仅为对TGEV进行深入的分子生物学研究提供了资料，为其基因工程疫苗的研制奠定了基础，并且也为该病毒的鉴定提供了一个便捷有效的方法，对猪传染性胃肠炎的防治有重要的现实意义。

以上为本篇毕业论文范文猪传染性胃肠炎M基因的克隆及序列分析的介绍部分。

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