ACE2基因转染对糖尿病心肌病大鼠心功能的影响

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ACE2基因转染对糖尿病心肌病大鼠心功能的影响

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毕业论文范文题目：ACE2基因转染对糖尿病心肌病大鼠心功能的影响，论文范文关键词：ACE2基因转染对糖尿病心肌病大鼠心功能的影响
ACE2基因转染对糖尿病心肌病大鼠心功能的影响毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：背景跟着糖尿病发病率的逐年回升,其并发的糖尿病性心肌病(diabeticcardiomyopathy,DCM)也日益受到人们的器重。越来越多证据表明,糖尿病心肌病是一个独破的、特异的心肌疾病无其余通常导致心功能减退的诱因如高血压、冠心病、瓣膜病、先本性心脏病等,也无动脉粥样硬化的证据。1974年,Hamby等首次提出了糖尿病心肌病的概念,并认为糖尿病心肌病变与糖尿病特有的代谢异样有关。其临床特点早期以心脏舒张功能不全、晚期以紧缩功能不全为主,轻易产生充血性心力衰竭。DCM的发病机制复杂,波及肾素血管缓和素体系(renin-angiotensinsystem,RAS)激活、能量代谢混乱、微血管微轮回妨碍、细胞内钙调节异样、自主神经功能混乱等多个因素,其核心肌细胞肥大及纤维化是DCM最重要的病理改变之一,而肾素-血管缓和素体系(RAS)在这一病理改变中发挥重要作用。血管缓和素转化酶-2(Angiotensin-convertingenzyme2,ACE2)是2000年发明的肾素-血管缓和素体系(RAS)新成员,与血管缓和素转化酶(Angiotensin-convertingenzyme,ACE)是同系物,两者的金属蛋白酶催化区有42%是一致的。ACE2重要分布于心脏跟肾脏的血管内皮细胞、冠状动脉血管平滑肌细胞等部位。在功能上,与ACE不同,ACE（文章此处忽略..）2能水解血管缓和素Ⅰ(angiotensinⅠ,AngⅠ)将其转换为Ang(1-9),并进一步在ACE或其余肽酶水解下生成Ang(1-7);或者直接水解血管缓和素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ),生成Ang(1-7),研究证明ACE2是AngⅡ水解的重要道路,而且Ang(1-7)是其重要产物。AngⅡ是目前公认的促心肌纤维化因素,可促进心肌成纤维细胞增殖跟胶原合成,导致心肌纤维化,心室适应性降落,终极致心室紧缩及舒张功能不全。Ang(1-7)作为一种心血管保护性多肽,存在舒张血管、抗成长跟抗增殖的作用。为此咱们拟在DCM动物模型的基本上,通过基因转染使ACE2过表白,降解AngⅡ,减少胶原合成,从而改良心功能。目标1.构建DCM动物模型2.察看ACE2基因转染后心肌ACE2的表白3.研究腺病毒为载体的ACE2基因转染对大鼠糖尿病心肌病的医治作用,并探讨其可能的机制方法72只体重为200—220g雄性Wistar大鼠,随机分为模型组(n=64只)跟畸形对比组(n=8只),模型组大鼠腹腔内打针链脲佐菌素(STZ)65mg/kg,畸形对比组大鼠打针等量柠檬酸钠/柠檬酸缓冲液。大鼠成糖尿病标准为:持续2次空腹血糖≥16.7mmol/L。血糖升高后,持续豢养12周,终极共60只大鼠成为糖尿病心肌病。将糖尿病心肌病大鼠随机均匀分为三个组:ACE2组心肌打针携带ACE2基因的重组腺病毒100μl(1×10~9pfu);EGFP组心肌打（略..）针空载重组腺病毒即加强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP)100μl(1×10~9pfu);DCM组心肌打针无菌生理盐水100μl。基因转染后10天,糖尿病心肌病各组随机取8只大鼠处死,实时荧光定量PCR法、免疫印迹(Westernblot)检测ACE2基因的表白;基因转染前及实验末,超声心动图检测左室紧缩末内径(leftventricularendsystolicdiameter,LVESD)、左室舒张末内径(leftventricularenddiastolicdiameter,LVEDD)、射血分数(leftventricularejectionfraction,LVEF)、短轴缩短率(fractionalshortening,FS),E/A比值;实验末组织病理学检查,惯例HE染色察看心肌细胞状况,Masson染色察看心肌组织胶原分布并定量分析,ELISA检测心肌AngⅡ含量;实验过程中,监测大鼠体重及空腹血糖。成果1.实验动物基本情况:实验过程中4只大鼠逝世亡,2只未达DCM标准予以剔除,终极共66只大鼠实事实验,其中畸形对比组8只,DCM19只,EGFP组19只,ACE2组20只。2.各组动物体重及血糖测定:STZ打针后1周,与畸形对比组比拟,DCM大鼠体重无明显差别(P＞0.05),空腹血糖明显升高(P＜0.01);实验末,与畸（文章此处忽略..）形对比组比拟,其它3组大鼠体重明显降落(P＜0.01),空腹血糖仍明显升高(P＜0.01)。3.实时荧光定量PCR检测成果:ACE2组ACE2mRNA的表白明显高于DCM组(P＜0.05)跟EGFP组(P＜0.05);DCM组与EGFP组差别无统计学意思(P＞0.05)。4.Westernblot检测ACE2蛋白表白:ACE2组ACE2蛋白的表白明显高于DCM组(P＜0.01)跟EGFP组(P＜0.01);DCM组与EGFP组差别无统计学意思(P＞0.05)。5.超声心动图检测:基因转染前,与对比组比拟,DCM大鼠超声心动图检测各项指标(包含LVESD、LVEDD、LVEF、FS、E/A比值)均有差别(P＜0.01),DCM各组之间差别无统计学意思(P＞0.05)。实验末,与DCM组、EGFP组比拟,ACE2组以上各指标均有好转(P＜0.05)。6.心肌组织病理学检查:HE染色切片上,畸形对比组心肌细胞排列整洁,细胞核大小均一,胞浆染色均匀;DCM组、EGFP组心肌细胞排列混乱,细胞核大小不甚规矩,可见肌纤维断裂、排列混乱;ACE2组较DCM组、EGFP组明显好转,心肌细胞排列较规整,肌纤维断裂少见,细胞核较规矩。7.Masson三色染色:心肌细胞染色呈红色,间质胶原呈蓝绿色,红细胞呈橘黄色。畸形对比组心肌胶原组织分布均匀;DCM组、EGFP组心肌间质胶原纤维明显增多,缭绕心肌细胞的胶原纤维断裂、排列混乱;ACE2组较DCM组心（此处忽略..）肌间质胶原纤维明显减少,相邻细胞的胶原纤维排列整洁。定量分析显示,与畸形对比组比拟,DCM组、EGFP组心肌组织胶原含量明显高(P＜0.01);与DCM组跟EGFP组比拟,ACE2组心肌组织胶原明显降落(P＜0.01)。8.心肌AngⅡ检测:与畸形对比组比拟,DCM组、EGFP组心肌AngⅡ含量明显高(P＜0.01);与DCM组比拟,ACE2组心肌AngⅡ含量明显减少(P＜0.01)。论断1.通过腹腔打针STZ并豢养12个周,成功树破了糖尿病性心肌病大鼠模型,为DCM发病机制的研究提供了坚固的平台;2.基因转染后,ACE2组大鼠ACE2mRNA跟蛋白表白程度明显升高。3.ACE2基因转染后,心肌AngⅡ程度降落,胶原含量减少,DCM大鼠心功能得到改良。

以上为本篇毕业论文范文ACE2基因转染对糖尿病心肌病大鼠心功能的影响的介绍部分。

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