机械创伤大鼠对心肌缺血/再灌注伤害的敏感性增加

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机械创伤大鼠对心肌缺血/再灌注伤害的敏感性增加

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毕业论文范文题目：机械创伤大鼠对心肌缺血/再灌注伤害的敏感性增加，论文范文关键词：机械创伤大鼠对心肌缺血/再灌注伤害的敏感性增加
机械创伤大鼠对心肌缺血/再灌注伤害的敏感性增加毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：研究背景：机械性创伤是我国城村夫群逝世亡的第5位逝世因，占总逝世亡人数的6.17%。近年来有很多临床报道指出，一些因为交通事变、体育活动或钝器等引起的胸部创伤患者，只管在创伤后24h内，心电图、X线、心肌酶谱等检查均未见明显异样，却在创伤后数天呈现心肌梗逝世。急性心肌梗逝世（AMI）是心血管疾病逝世亡率的一个重要因素。尽早有效地恢复对缺血心肌的血液再灌注，是禁止心肌梗逝世发展、减警惕梗面积，从而改良临床预后的最佳打算。然而，缺血心肌顺利再灌后会产生不同程度的再灌注伤害。近年来，很多研究表明，合并有高危因素（如：高血糖、高血脂）的心梗患者，在给予有效的心肌再灌注后，会进一步加重再灌注伤害，甚至导致急性心力衰竭跟逝世亡。那么，合并创伤史的心梗患者在给予缺血心肌再灌注后，是否也会进一步加重再灌注伤害呢？细胞凋亡（apoptosis）又称程序性细胞逝世亡，是指细胞在必定前提下通过启动其内部机制，重要通过内源性DNA内切酶的激活而产生的细胞天然逝世亡过程。研究已证明，细胞凋亡存在于缺血/再灌注伤害中，克制凋亡可能明显减警惕梗面积。咱们课题组前期研究已证明创伤可引起大鼠心肌细胞凋亡。然而，创伤后大鼠再行缺血/再灌注处理，对心肌细胞的凋亡有何影响呢？本研究旨在探讨创伤大鼠行缺血/再灌注处理后，是否会通过进一步加重心肌细胞的凋亡，进而加重心肌缺血/再灌注伤害。目标：1.察看机械创伤大鼠心肌对心肌缺血/再灌注伤害的敏感性。2.察看创伤大鼠行缺血/再灌注处理后，是否会通过进一步加重心肌细胞的凋亡，进而增加对心肌缺血/再灌注伤害的敏感性。方法：1.实验动物与分组健康雄性SD大鼠,体重180~220g，采取完全随机分组方法分为假创伤+假手术组、假创伤+缺血/再灌注组、创伤+假手术组、创伤+缺血/再灌注组跟创伤+缺血/再灌注+Z-VAD-FMK组。2.机械创伤模型制备水合氯醛腹腔打针麻醉大鼠。将大鼠放入Noble-Coll（此处忽略..）ip创伤仪中，以40r/min滚动5min，大鼠在滚动过程中由高处跌落造成机械性创伤，假创伤大鼠则用胶带粘贴固定于创伤仪的壁上，只伴随创伤仪滚动而不禁高处跌落。3.心肌缺血/再灌注动物模型的树破乌拉坦腹腔打针麻醉大鼠后，仰卧位固定于鼠台上，行气管插管，四肢连接心电监测电极。在心脏搏动最明显处开胸、裸露心脏，打开心包，用6-0丝线结扎左冠状动脉前降支，T波高尖或ST段弓背抬高，表示缺血成功。缺血30min后，松开结扎线使心肌再灌注，再灌注3h。假手术组仅穿线而不结扎左冠状动脉前降支。4.大鼠在体心功能测定利用BL-410生物信号分析体系记录大鼠心率（HR）、均匀动脉压（MABP）、左心室紧缩压（LeftVentricularSystolicPressure，LVSP）、左心室舒张末压（LeftVentricularEndDiastolicPressure，LVEDP）、左心室压力回升跟降落最大变更速率（±dp/dtmax）。5.肌酸激酶同工酶MB（CK-MB）跟心肌肌钙蛋白（cTnI）的检测采取CK-MB跟cTnI检测试剂盒对大鼠血清CK-MB跟cTnI含量进行测定。取96孔酶标板，向各孔参加预先配好的标准品或待测样品各100ul，接下来顺次向各孔参加第一抗体工作液100ul、酶标抗体工作液100ul、底物工作液100ul跟终止液100ul，在450nm处读取吸光度值（A），根据样品A值在标准曲线上查出相应CK-MB跟cTnI含量（ng/ml）再乘上稀释倍数即为CK-MB跟cTnI的程度。6.心肌梗逝世面积测定再灌注3h末，再次结扎左冠状动脉前降支，从腹腔静脉敏捷注入伊文思蓝2ml，待大鼠口唇及四肢末梢皮肤蓝染后敏捷摘除心脏，滤纸吸除心室腔中残余染液，剔除左心室外其余部分，-80℃冻存。取出-80℃冻居心脏，垂直于心脏纵轴方向自心底向心尖将心脏均匀切成6片厚约1~2mm的环形薄片，置于37℃的2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC）（溶于PBS中）中孵育15min，经（本文此处忽略..）扫描仪对心脏切面进行扫描后，利用Image-ProPlus6.0图像分析软件分辨测定蓝色、红色跟白色区域面积。左心室面积（leftventricle，LV）为蓝色、红色跟白色面积之跟；危险区面积（areaatrisk，AAR）为红色跟白色面积之跟；梗逝世区面积（areaofnecrosis，AN）为白色面积。危险区面积百分比（AAR/LV，%）=（危险区面积/左心室区面积）×100%；心梗面积百分比（AN/AAR，%）=（梗逝世区面积/危险区面积）×100%。7.心肌组织Caspase-3活性测定采取Caspase-3荧光检测试剂盒检测Caspase-3活性。裂解心肌组织，用考马斯亮兰蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度，将酶标板各孔中顺次参加样品裂解液、底物工作夜后，用酶标仪测定吸光度值（OD值），用每孔OD值/蛋白浓度代表大鼠心肌组织Caspase-3的活性。8.TUNEL法检测心肌细胞凋亡心肌组织制造石蜡切片后，进行TUNEL染色，每张切片随机选取20个视线，每个视线在激光共聚焦显微镜下计数100个细胞，蓝色代表所有心肌细胞核，绿色代表凋亡心肌细胞核。凋亡指数用各视线范畴内总凋亡细胞数除以全部细胞数表示。9.统计学分析实验数据以—x±s表示，利用SPSS13.0统计软件，两组间均数的比较采取成组设计材料的t测验，多组间均数的比较采取单因素方差分析，P0.05为差别有统计学意思。成果1.机械创伤大鼠对心肌缺血/再灌注伤害的敏感性增加1.1创伤+缺血/再灌注组大鼠在体心功能明显降落与假创伤+缺血/再灌注组比拟，创伤+缺血/再灌注组的+dp/dtmax跟LVSP均明显降落[+dp/dtmax：（1988±182）mmHg/sec，vs.（3644±171）mmHg/sec，P0.01；LVSP：（61±13）mmHgvs.（94±5）mmHg，P0.01]；创伤+缺血/再灌注组的-dp/dtmax明显降落，LVEDP明显升高[-dp/dtmax：（-1622±200）mmHg/sec，vs.（-2543±251）mmH（本文此处忽略..）g/sec，P0.01；LVSP：(26.5±1.9)mmHgvs.(15.9±1.5)mmHg，P0.01]。1.2创伤+缺血/再灌注组大鼠血清CK-MB跟cTnI程度明显升高与假创伤+缺血/再灌注组比拟，创伤+缺血/再灌注组大鼠血清CK-MB含量明显升高（4960±588ng/ml：2925±426ng/ml，P0.01）；创伤+缺血/再灌注组大鼠血清cTnI含量也明显升高（18.10±3.06ng/ml：6.67±1.57ng/ml，P0.01）。1.3创伤+缺血/再灌注组大鼠心肌梗逝世面积明显增大与假创伤+缺血/再灌注组比拟，创伤+缺血/再灌注组心肌梗逝世面积明显增大[（36.70±7.42）%：（22.27±4.54）%]，（P0.01）。2.机械创伤大鼠对心肌缺血/再灌注伤害的敏感性增加的可能机制2.1创伤+缺血/再灌注大鼠心肌细胞凋亡明显增加采取Caspase-3活性测定跟TUNEL两种方法检测心肌细胞凋亡。与假创伤+缺血/再灌注组比拟，创伤+缺血/再灌注组大鼠心肌Caspase-3活性跟心肌细胞凋亡指数均明显升高[Caspase-3活性：78.9±8.1%vs.48.2±3.8%，P0.01；凋亡指数：30.5±1.6%vs.22.6±1.5%，P0.01]。2.2给予凋亡克制剂Z-VAD-FMK后，创伤+缺血/再灌注组大鼠心肌细胞凋亡明显减少与创伤+缺血/再灌注组比拟，创伤+缺血/再灌注+Z-VAD-FMK组大鼠心肌组织中细胞凋亡指数跟Caspase-3活性明显降落[Caspase-3活性：32.4±6%vs.78.9±8.1%，P0.01；凋亡指数：11.2±1.4%vs.30.5±1.6%，P0.01]。2.3给予凋亡克制剂Z-VAD-FMK后，创伤+缺血/再灌注组大鼠心肌梗逝世面积明显缩小与创伤+缺血/再灌注组比拟，创伤+缺血/再灌注+Z-VAD-FMK组大鼠心肌梗逝世面积明显缩小[（22±2.2%）%：（40±3.9%）%]，有明显统计学差别（P0.01）。2.4给予凋亡克制剂Z-VAD-FMK后，创伤+缺血/再灌注组大鼠血清CK-MB跟cTnI程度明显降落。与创伤+缺血/再灌注组比拟，创伤+缺血/再灌注+Z-VAD-FMK组大鼠血清CK-MB跟cTnI程度明（本文此处忽略..）显降落[CK-MB：（1474±520）ng/mlvs.（4960±588）ng/ml，P0.01；cTnI：(6.75±0.73)ng/mlvs.（18.10±3.06）ng/ml,P0.01]。2.5给予凋亡克制剂Z-VAD-FMK后，创伤+缺血/再灌注大鼠在体心功能明显改良。与创伤+缺血/再灌注组比拟，创伤+缺血/再灌注+Z-VAD-FMK组大鼠心肌紧缩跟舒张功能得到明显改良[+dp/dtmax：(4217±115)mmHg/secvs.（1988±182）mmHg/sec，P0.01；-dp/dtmax：（-3623±134）mmHg/secvs.（-1622±200）mmHg/sec,P0.01]。论断1.机械创伤使大鼠心肌对心肌缺血/再灌注伤害的敏感性增加。提示临床医生尤其是心血管科医生在问诊时要留神患者是否有外伤史，对有外伤史的病人要更加密切关注。2.心肌细胞凋亡是机械创伤使大鼠心肌对心肌缺血/再灌注伤害的敏感性增加的起因之一。提示临床对有创伤史的心梗患者，在恢复再灌注前采取有效办法阻断心肌细胞凋亡的产生，将有可能减轻心肌缺血/再灌注伤害的程度。

以上为本篇毕业论文范文机械创伤大鼠对心肌缺血/再灌注伤害的敏感性增加的介绍部分。

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