牛副流感病毒3型的分别鉴定跟间接ELISA方法树破及初步利用

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牛副流感病毒3型的分别鉴定跟间接ELISA方法树破及初步利用

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毕业论文范文题目：牛副流感病毒3型的分别鉴定跟间接ELISA方法树破及初步利用，论文范文关键词：牛副流感病毒3型的分别鉴定跟间接ELISA方法树破及初步利用
牛副流感病毒3型的分别鉴定跟间接ELISA方法树破及初步利用毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：牛呼吸体系综合征Bovinerespiratorydiseasecomplex(BRDC)是引起世界范畴内的舍饲牛发病跟逝世亡的重要起因,给养牛业带来了重大的经济丧失,牛副流感病毒3型(BPIV-3)是BRDC的重要病原之一,本研究旨在从存在BRDC的患牛体内分别BPIV-3;利用基因工程方法获得BPIV-3的HN蛋白抗原,树破间接ELISA检测方法,分辨用病毒中跟实验跟间接ELISA方法监测病牛抗体变更,通过比较断定最佳的中跟抗体的检测方法,为下一步疫苗的开发提供有效的抗体检测手段。将采集的病牛鼻汁跟牛乳经处理后分辨接种到MDBK细胞进行病毒的分别,当产生牢固的细胞病变(C（略..）PE)以掉队行CPE跟扫描电镜察看、理化特点实验、血凝实验、病毒中跟实验以及RT-PCR方法鉴定分别的病毒；利用DNAstar软件在HN蛋白的抗原表位区设计一对表白引物,利用RT-PCR方法扩增HN基因,经pMD18-T适度当前再将HN基因连接到PQE30表白载体,把重组载体PQE30-HN经IPTG引诱后在大肠杆菌XL1blue中表白,用SDS-PAGE跟Western-blotting鉴定重组蛋白；利用电洗脱方法纯化重组HN蛋白,经抗原浓度、包被抗原时光、封闭液的品种跟封闭时光等前提的优化,以及特异性、敏感性跟反复性实验等树破间接ELISA方法；最后利用树破的间接ELI（略..）SA方法跟病毒中跟实验跟踪监测5头典范发病牛中跟抗体13个月,并将检测成果与病毒中跟实验监测成果进行比较分析,同时利用该ELISA方法对4个农场的523份牛血清进行抗体检测,初步懂得黑龙江垦区牛副流感病毒3型的感染情况。从病料中分别到一种RNA病毒,可能与参考毒株BPIV-3抗血清产生病毒中跟反应,与BPIV-3的HN基因同源性高达99.8%。发病牛中跟抗体跟踪监测成果显示,痊愈期抗体效价是急性期的4倍以上。本实验成功构建了表白载体pQE30-HN,而且在大肠杆菌XL1blue中成功引诱表白得到约40kDa的重组蛋白,经Western-blotting实验表明重组HN可能与BPIV-3阳性血清反应,（略..）证明该蛋白存在良好的抗原性。得到间接ELISA方法最优的抗原包被浓度(6μg/ml)、血清稀释度(1：50)、封闭液(5%脱脂奶粉)、封闭时光(37℃60min),二抗浓度(1：10000)、临界值(OD4500.297)。特异性实验显示与BPIV-3阳性血清反应呈阳性,而与牛冠状病毒、牛感染性鼻气管炎病毒跟牛呼吸道合胞体病毒阳性血清检测成果为阴性,敏感性实验成果表明比病毒中跟实验检测的抗体效价高2-4个滴度,感染牛抗体检测成果表明感染牛的中跟抗体效价发病初的6-8个月内可能保持在1：32～1：128,而后开端降落,最后保持在1：8～1：16之间。间接ELISA检测的抗体变更趋势与病毒中跟实验类似,但间接ELISA检测的抗体滴度比病毒中跟实验高2-4个滴度,同时利（略..）用树破的的ELISA检测方法监测的523份牛血清成果为,新华农场(24／52)；绿色草原农场(24／87)；855农场(101／131)；291农场(38／53)阳性率跟抗体阳性率分辨为46.15%、77.10%、77.70%。本实验成功分别了BPIV-3,证明BPIV-3也是我国BRDC的病原之一；成功获得了重组HN蛋白,并树破了特异性强敏感性较高的间接ELISA检测方法。

以上为本篇毕业论文范文牛副流感病毒3型的分别鉴定跟间接ELISA方法树破及初步利用的介绍部分。

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