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羊绿脓杆菌及其重要致病因子研究

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毕业论文范文题目：羊绿脓杆菌及其重要致病因子研究，论文范文关键词：羊绿脓杆菌及其重要致病因子研究
羊绿脓杆菌及其重要致病因子研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：跟着我国养羊业粗放化的始终扩大，羊群疾病产生的品种在始终增加，近年来羊的一种慢性肺炎就是由范围化豢养当前呈现的一种新疾病。该病重要表示为咳嗽，呼吸艰苦，慢性消瘦，后期产生逝世亡，给范围化养羊场造成了宏大丧失，对养羊业造成了重大威胁。通过风行病学考察跟病原检测，探明了导致该病的病原体为绿脓杆菌(Pseudomonasaeruginosa，PA)。本研究在断定绿脓杆菌是羊慢性肺炎致病菌的基本上，重点对该菌最重要致病因子外毒素A进行体系研究，从而为研究该病的发病机制跟把持办法提供实际根据。本课题分四部分进行研究。第一部分：羊绿脓杆菌的分别、鉴定采取微生物学方法，对山东省某粗放化羊场产生的一种慢性肺炎进行了体系的病原学研究。通过分别培养、显（本文此处忽略..）微镜检查，发明引起该病的病原体为一种革兰氏阴性小杆菌，此菌无芽胞、无荚膜，有鞭毛，可产生水溶性的蓝绿色色素，再结合生化实验等指标终极鉴定该菌为铜绿假单胞菌。用24h细菌培养物分辨腹腔接种3日龄雏鸡(0.1ml／只)、10日龄鸡胚(0.1ml／只)、小白鼠(0.1ml／只)跟成年家兔(0.3ml／只)，均于24h内逝世亡。用该菌接种健康羊，复制出了与天然发病羊雷同的病状，并从逝世亡实验动物跟人工发病逝世亡的羊体内回收到了接种的病原体。第二部分：平板凝集抗原的制备及羊慢性肺炎的血清学考察用分别纯化病原菌制成平板凝集诊断原，经牢固性实验、无菌实验、自凝跟穿插凝集实验成果证明，自制的平板凝集诊断原性质牢固成果坚固。利用该诊断抗原，自2001年11月至2002年5月，从山东省泰安、菏泽、济宁、聊城、潍坊、（本文此处忽略..）济南、日照、莱芜等地(市)的养羊场/户共抽检羊246只，用平板凝集实验检测羊血清中抗PA抗体。成果发明，阳性率为94.7％。临床健康羊群抗体均匀滴度为2.23log2，其中存在临床症状羊只体内抗体均匀滴度为3.001og2。统计分析表明，除泰安羊的抗体滴度明显高于菏泽、潍坊、日照、济南的羊抗体滴度之外，泰安与其余地区及其余地区之间的羊抗体均匀滴度差别不明显。在考察的全部羊群中，均存在该病的感染。第三部分：绿脓杆菌外毒素A研究以TSB(TrypticSoyBroth)透析液作为基本，参加0.05M谷氨酸钠跟1％甘油，于32℃震动培养22h为产毒前提。4℃10000r／min离心30min，收集培养上清液。培养上清液分辨用30％饱跟硫酸铵去除杂蛋白、60％饱跟硫酸铵粗提外毒素。而后用流水透析除盐，过DEAE柱（本文此处忽略..）跟SephedexG-200纯化。用分光光度法测浓度为0.857mg／ml。用环状积淀实验初步检测为阳性，用SDS-PAGE进一步检测，成果显示出了分子量为66KD的一条蛋白带，与报道的标准毒株外毒素A大小相一致。将提出的外毒素A接种BALB／C小鼠(接种0.8ml／只)无致病性，但用PA4倍稀释的上清液(0.2ml／只)则可致逝世小白鼠，这可能与提取过程中毒性丧失等因素有关，但用纯化的毒素免疫家兔，成果获得了滴度为10log2的高程度抗体。阐明外毒素A存在良好的免疫原性。分辨以外毒素A作为抗原跟自制兔抗PEA阳性血清为抗体，树破了ELISA(夹心法)检测羊血清中抗PEA抗体的方法。该法灵敏度高，特异性强，适于大范围羊场的检疫。第四部分：外毒素AⅢ区基因的克隆及序列分析利用（文章此处忽略..）PCR技巧，以绿脓杆菌李雅林：羊绿脓杆菌及其重要致病因子研究（暂命名为叩－SD－l株）的染色体DNA为模板，成功扩增出了该菌重要致病基因（绿脓杆菌外毒素A）111区基因。将该PCR扩增片段与yGE旷－TEass载体连接，获得了插入目标片段的重组质粒（命名为PA－SD－ETA）。序列测定成果表明，该菌株与已报道的其余绿脓杆菌菌株有较高的同源性（同源性大于96．8％）o与标准株PA103有97．7％的同源性，并呈现单个碱基的点渐变。

以上为本篇毕业论文范文羊绿脓杆菌及其重要致病因子研究的介绍部分。

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