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人脐带间充质干细胞移植对大鼠闭合性颅脑伤害的作用研究

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毕业论文范文题目:人脐带间充质干细胞移植对大鼠闭合性颅脑伤害的作用研究,论文范文关键词:人脐带间充质干细胞移植对大鼠闭合性颅脑伤害的作用研究
人脐带间充质干细胞移植对大鼠闭合性颅脑伤害的作用研究毕业论文范文介绍开始:
【论文摘要】:目标:树破大鼠颅脑伤害(traumaticbraininjury,TBI)模型,察看人脐带间充质干细胞(humanumbilicalcordmesenchymalstemcells,hUC-MSCs)在伤害脑组织中存活、迁徙跟分化情况,以及对伤害神经功能恢复的影响;初步探讨hUC-MSCs医治颅脑伤害的作用机制,为其在颅脑伤害医治的利用提供实际根据。方法:取足月妊娠剖宫产健康新生儿的脐带,D-Hank’s液充分洗去残留血液,剔除脐动脉跟脐静脉,将残余的脐带间质组织剪成约1mm3大小的组织块,用0.2%胶原酶Ⅱ消化后放入含有20%胎牛血清(fetalbovineserum,FBS)、100U/ml青霉素,100μg/ml链霉素的DMEM/F12中培养。察看原代培养细胞的状况学变更,当细胞达到80%~90%汇合时,进行消化并传代培养。收集消化后的细胞,流式细胞术检测CD45-PE、CD90-PE、CD105-PE、CD73(SH3)-PE、CD11b-PE跟CD34-FITC、CD19-FITC,HLA-DR(HLA-II)-FITC,并以小鼠IgG1-PE跟小鼠IgG1-FITC作为同型对比。选健康成年雄性Sprague-Dawley(文章此处忽略..)(SD)大鼠,体重270g~320g,采取液压冲击法制备颅脑伤害模型,24h后,按照改进神经功能评分(modifiedNeurologicalSeverityScore,mNSS)标准进行神经功能评分(Table1),将7~12分(中度伤害)的50只大鼠纳入实验并随机分为三组:(1)hUC-MSCs组:20只,评分结束后将1,1'-双十八烷-3,3,3',3'-四甲基吲哚羰花青-高氯酸盐(1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanineperchlorate,DiI)标记的第5代hUC-MSCs移植到颅脑伤害部位,取两点,每点5μl,总细胞数为1×10~6个;(2)磷酸盐缓冲液(phosphatebufferedsaline,PBS)组:20只,颅脑伤害部位以PBS调换hCU-MSCs打针,亦取两点,每点5μl;(3)单纯颅脑伤害组:10只,仅行颅脑伤害,伤害部位既不移植hUC-MSCs,亦不打针PBS。另随机选10只大鼠为(4)假手术组:只开骨窗,不行颅脑伤害,亦不打针hUC-MSCs或PBS。大鼠于hUC-MSCs移植/PBS打针后第1、7、14、21、28d采取mNSS进行神经功能评分,察看大鼠神经功能改良跟(本文此处忽略..)恢复情况。评分结束后处死大鼠,取脑组织行持续冰冻切片,厚5μm。免疫荧光方法检测hUC-MSCs在脑组织内存活、迁徙、分化情况,以及胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)、神经元特异性烯醇化酶(neuronspecificenolase,NSE)、微管相干蛋白2(microtubule-associatedprotein2,MAP-2)、八因子相干抗原(factorVIIIrelatedantigen,Ⅷ-RAg)、神经微丝(neurofilament,NF)、巢蛋白(Nestin)的表白情况。成果:原代细胞培养24h后察看到有少量细胞贴壁,8~10d后细胞大部分贴壁。2w时,细胞汇合达到80%~90%,消化后按1:2或1:3的比例传代。细胞传代后成长敏捷,状况均一,5~6d可传一代。流式细胞术检测成果显示:hUC-MSCs表白间充质干细胞名义抗原CD73、CD90、CD105,不表白造血前体细胞名义抗原CD34、B型淋巴细胞名义抗原CD19、中性粒细胞名义抗原CD11b、白细胞名义抗原CD45跟HLA-DR,从而证明该细胞是MSCs。移植前采取噻唑蓝[3-(4,5)-dimethylth(此处忽略..)iahiazol-2-y1-2,5-diphenytetrazoliumbromide,MTT]法检测hUC-MSCs细胞活力,细胞存活率达95%以上。移植hUC-MSCs移植后28d内,hUC-MSCs组逝世亡1只,逝世亡率4.8%;PBS组逝世亡10只,逝世亡率33.3%;单纯颅脑伤害组逝世亡6只,逝世亡率37.5%。hUC-MSCs组的逝世亡率低于PBS组跟单纯颅脑伤害组,差别有统计学意思(P0.05)。PBS组(5只)跟单纯颅脑伤害组(3只)呈现明显腹胀,hUC-MSCs组未发明明显腹胀的大鼠。hUC-MSCs组跟PBS组比较,差别无统计学意思(P0.05);hUC-MSCs组跟单纯颅脑伤害组比较,差别有统计学意思(P0.05)。神经功能评分成果(Table3)显示:hUC-MSCs移植后,神经功能评分有随时光变更趋势,hUC-MSCs组神经功能恢复优于PBS组跟单纯颅脑伤害组,差别有统计学意思(P0.05)。hUC-MSCs移植28d后,脑组织切片行免疫组织荧光检测,发明hUC-MSCs在伤害灶存活,沿白质方向迁徙且部分迁徙至血管四周。部分移植细胞表白神经干细胞标记Nestin、神经元细胞标记NSE、NF、MAP(本文此处忽略..)2、星形胶质细胞名义标记GFAP跟血管内皮细胞标记Ⅷ-RAg。脑组织切片经4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染核发明,脑组织伤害部位细胞核碎裂、溶解,以PBS组跟单纯颅脑伤害组数量为多,而hUC-MSCs移植组数量较少。论断:1.hUC-MSCs移植可明显促进大鼠颅脑伤害后神经功能恢复。2.hUC-MSCs可在大鼠颅脑伤害部位存活、迁徙,并表白GFAP、NSE、MAP2、NF、Nestin、Ⅷ-RAg。3.hUC-MSCs移植对颅脑伤害后消化体系功能的恢复可能发挥必定作用。


以上为本篇毕业论文范文人脐带间充质干细胞移植对大鼠闭合性颅脑伤害的作用研究的介绍部分。
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