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低浓度血清法培养纯化新生大鼠雪旺细胞

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毕业论文范文题目:低浓度血清法培养纯化新生大鼠雪旺细胞,论文范文关键词:低浓度血清法培养纯化新生大鼠雪旺细胞
低浓度血清法培养纯化新生大鼠雪旺细胞毕业论文范文介绍开始:
【论文摘要】:雪旺细胞(Schwanncell,SCs)是四周神经系同一种重要的胶质细胞,可能构成有髓跟无髓神经纤维的神经内膜组织,存在多种的生理学功能,增生的雪旺细胞可能产生跟分泌多种的可能促进神经伤害后神经再生修复的神经养分因子跟细胞粘附分子等。在神经的再生过程中,雪旺细胞可能通过吞噬变性的轴突跟髓鞘碎屑、分泌多种神经养分因子(包含NGF,BDNF等)、分泌层粘连蛋白等多种基底膜成份等道路,为近端轴突的再生提供一个良好的再生微环境,领导轴突再生。跟着组织工程技巧的发展,在可能构建神经导(本文此处忽略..)管的支架材料上种植雪旺细胞,移植人体可能促进轴突的疾速成长,进一步的促进神经修复,然而如何可能疾速与大量的获得纯度高、状况好的雪旺细胞是移植成功与否的关键。目标:1.探讨分别,培养,SD大鼠雪旺细胞的方法。2.利用低浓度血清培养基纯化体外培养的新生大鼠的雪旺细胞。3.察看跟检测低浓度血清处理后的雪旺细胞生物学性状跟神经因子分泌才能的影响。方法:1.取新生3-7日的SD大鼠双侧坐骨神经,显微镜下将神经剪碎至1mm3左右大小的神经碎块,利用双酶消化法分别培养,光镜察看细胞状况及细胞成长情(此处忽略..)况。6天后分辨以含有胎牛血清浓度为10%、2%及无血清DMEM培养基处理原代培养的雪旺细胞6天后,终止培养,并收集细胞。2.分辨取原代培养及处理过后的雪旺细胞,采取免疫组化技巧:以SABC方法标记雪旺细胞的特异性标记性蛋白S100,并在200倍显微视线下以细胞计数方法分辨统计雪旺细胞及成纤维细胞数,从而得到雪旺细胞的纯度即雪旺细胞数/雪旺细胞+成纤维细胞数,获得数据以t测验方法进行比较;流式细胞仪检测细胞增值比率:在终止细胞培养时,以0.25%胰酶消化细胞,并以70%无水乙醇固定细胞,利用流式细胞仪分析得到S(此处忽略..)期、G2期的比率并进行统计学分析;利用RT-PCR法NGF、BDNF的mRNA在细胞内的表白情况:在终止处理后,以Trizol提取液方法提取细胞的总RNA以β-肌动蛋白(β-actin)做内标准,利用反转录-多聚酶链反应(RT-PCR)对A组跟B组的NGF、BDNF的mRNA进行扩增,取PCR产物行l%琼脂糖凝胶电泳,测量其灰度值,分辨打算NGF、BDNF跟内标基因(β-actin)PCR产物的灰度比值半定量跟NGF、BDNF;统计学分析:数据采取SPSS11.0统计软件进行统计分析。成果(此处忽略..):1.以2%浓度血清DMEM培养基分别培养纯化后,雪旺细胞的状况好,统计学成果分析表明其纯度达到96.9%以上。2.处理后的细胞S100蛋白表白牢固,各组之间的细胞周期S期、G2期的比率雷同、NGF及BDNF分泌才能未受到影响。论断:利用低浓度血清方法处理原代培养的雪旺细胞,处理后雪旺细胞的生物学性状未受到影响。此方法简化了雪旺细胞的培养纯化方法,有效地把持了成纤维细胞传染。


以上为本篇毕业论文范文低浓度血清法培养纯化新生大鼠雪旺细胞的介绍部分。
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