RNA烦扰克制EphB4基因表白对胰腺癌PANC-1细胞的影响

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RNA烦扰克制EphB4基因表白对胰腺癌PANC-1细胞的影响

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毕业论文范文题目：RNA烦扰克制EphB4基因表白对胰腺癌PANC-1细胞的影响，论文范文关键词：RNA烦扰克制EphB4基因表白对胰腺癌PANC-1细胞的影响
RNA烦扰克制EphB4基因表白对胰腺癌PANC-1细胞的影响毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目标:胰腺癌是一种恶性程度很高的消化体系肿瘤,它重大迫害着人类的生命健康。因为它发病隐匿、进展敏捷,传统医治方法的后果不能令人满意,医治艰苦,预后极差,因此研究出诊治胰腺癌的新方法显得尤为重要。近年来,跟着基因医治技巧的敏捷发展以及胰腺癌相干基因研究的始终深刻,胰腺癌的基因诊断跟基因医治正在进一步的摸索中。肿瘤的血管成长及构成是促进肿瘤产生发展跟侵袭转移的重要因素,所以克制胰腺癌的血管构成,降落胰腺癌组织中的血管含量,禁止其疾速增加就显得尤为重要。EphB4受体促进了血管内皮细胞的增殖、迁徙跟管腔构成,参加调控胚胎期血管构成过程中的动静（此处忽略..）脉分化。目前,有文献报道EphB4受体在胰腺导管细胞癌中的高表白与肿瘤血管的生成及侵袭性有密切相干性。RNAi通过外源性或内源性的双链RNA(dsRNA),特异性结合了与dsRNA序列互补的mRNA,引诱该mRNA的降解,沉默该基因的表白,属于转录后程度的基因沉默。目前,它的利用范畴非常广,可用于肿瘤基因功能分析跟调控信号转导通路等方面,为肿瘤的基因医治提供新的目标跟道路。本实验通过构建EphB4基因的siRNA真核表白载体,转染胰腺癌PANC-1细胞后,研究RNAi对PANC-1细胞EphB4基因的表白跟细胞增殖、迁徙行动的影响,为以掉队一步研究（此处忽略..）胰腺癌基因医治提供基本。方法:①软件分析EphB4基因的mRNA构造,筛选出拟烦扰靶位点,构建EphB4基因的烦扰质粒pSIREN-RetroQ-ZsGreen-EphB4跟阴性对比质粒pSIREN-RetroQ-ZsGreen-N,经过测序鉴定后,提取重组质粒转染PANC-1细胞;②实验分成空白对比组、pSIREN-RetroQ-ZsGreen-EphB4组跟pSIREN-RetroQ-ZsGreen-N组,进行体外实验;③在重组质粒转染细胞48h后,用RT-PCR跟Western-blot分辨测定EphB4mRNA跟EphB4蛋白的绝对含量,察看各（文章此处忽略..）重组质粒刹时转染PANC-1细胞后对EphB4基因表白的影响;④MTT测定细胞增殖才能;⑤划痕迁徙实验检测细胞的迁徙才能。成果:①测序鉴定证明重组质粒pSIREN-RetroQ-ZsGreen-EphB4跟pSIREN-RetroQ-ZsGreen-N构建成功;②刹时转染48h后,脂质体+烦扰质粒组PANC-1细胞中EphB4mRNA的表白程度较空白组、脂质体组、烦扰质粒组跟脂质体+对比质粒组明显降落(P﹤0.05);空白组、脂质体组、烦扰质粒组跟脂质体+对比质粒组四组间比较,差别不明显(P﹥0.05);③Western-blot法测定发明,脂质体+烦扰质粒组PANC（略..）-1细胞中EphB4蛋白的表白程度较空白组跟脂质体+对比质粒组明显降落(P﹤0.05);空白组跟脂质体+对比质粒组两组间比较,差别不明显(P﹥0.05);④克制EphB4基因的表白使PANC-1细胞的增殖才能有所减弱,细胞的迁徙才能与对比组比较有所降落。论断:成功构建靶向EphB4的siRNA真核表白载体并有效转染胰腺癌PANC-1细胞。烦扰质粒能有效地克制胰腺癌PANC-1细胞EphB4基因的mRNA跟蛋白表白,同时PANC-1细胞的体外增殖跟迁徙才能明显降落。

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