组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）渐变体乳腺特异性表白载体的构建及

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组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）渐变体乳腺特异性表白载体的构建及

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毕业论文范文题目：组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）渐变体乳腺特异性表白载体的构建及，论文范文关键词：组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）渐变体乳腺特异性表白载体的构建及
组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）渐变体乳腺特异性表白载体的构建及毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：组织型纤溶酶原激活剂(tissue-typeplasminogenactivator,t-PA)是医治血栓性疾病的重要药物。自1980年首次证明t-PA存在高效特异性的溶栓作用以来,t-PA因其与纤维蛋白亲跟力高、引起全身出血偏向小、溶栓才能强等长处而被广泛用于各种血栓性疾病的医治。然而t-PA在血液中的半衰期甚短(3min～5min),在临床医治中必须大剂量静脉滴注才干保持其有效浓度,增加了全身出血的危险。目前,临床上用于血栓性疾病医治的t-PA重要靠大范（文章此处忽略..）围培养哺乳动物细胞出产,存在出产本钱高、产量小、浓度低等缺点,以致t-PA价格昂贵临床医治费用高。利用动物乳腺生物反应器来出产不仅保持出产的本钱低,而且产量高还能进行翻译后润饰跟正确折叠。本研究以山羊β-乳球蛋白基因调控区为领导元件,以人组织型纤溶酶原激活剂F、E、K1区及Asp117糖基化位点缺失体为表白序列,构建了乳腺特异性表白载体pBCrt-PA,转染山羊乳腺上皮细胞,筛选获得牢固表白细胞株。利用PCR法以实验室保存的野生型t-PAcDNA（文章此处忽略..）为模板扩增出长度约1.1kb含K2跟P区的t-PA部分序列。同时,合成一段长度为60bp的山羊β-乳球蛋白信号肽编码序列。利用定向克隆法,将山羊β-乳球蛋白信号肽编码序列插入到克隆载体pCEP4中。而后,将已扩增的t-PAcDNA序列定向克隆到山羊β-乳球蛋白信号肽编码序列之后。再将含有CMV、山羊β-乳球蛋白信号肽编码序列、t-PA以及SV40p(A)序列的基因片段,克隆到实验室已有的通用乳腺特异性表白载体BnF95中,终极构建了由山羊β-乳球蛋白基因5′、3′调（此处忽略..）控序列领导的t-PAcDNA渐变体乳腺特异性表白载体pBCrt-PA。进一步用SalI、NotI双酶切pBCrt-PA回收大小约9.8kb的转基因片段。通过电击转染法将转基因片段导入体外培养的奶山羊乳腺上皮细胞。经G418筛选三周后得到62株抗G418的阳性细胞株。提取抗G418的阳性细胞株基因组DNA,经PCR检测初步确认有22株细胞中整合了外源基因。用催乳素对PCR检测阳性细胞株进行引诱表白,收集引诱表白48h后细胞上清进行ELISA检测。检测成果表明,有2株PCR检测（略..）阳性细胞株可表白t-PA渐变体,但表白量绝对较低,其表白程度分辨为5.98ng/ml跟2.35ng/ml。对表白产物的活性、半衰期检测以及如何进步表白程度有待进一步研究。t-PA渐变体基因的克隆以及这种载体构建思路,为将来制备转基因山羊乳腺生物反应器大量出产特异溶栓活性强、半衰期延长的新型溶栓药物,提供了强有力的实验根据,存在重要的领导意思。

以上为本篇毕业论文范文组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）渐变体乳腺特异性表白载体的构建及的介绍部分。

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