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家蝇金属硫蛋白的cDNA克隆与序列测定

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毕业论文范文题目：家蝇金属硫蛋白的cDNA克隆与序列测定，论文范文关键词：家蝇金属硫蛋白的cDNA克隆与序列测定
家蝇金属硫蛋白的cDNA克隆与序列测定毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：本文在前人对家蝇MT研究的基本上，进一步摸索体外扩增家蝇MTcDNA基因。实验中采取2mMCd~2对家蝇初孵幼虫引诱48小时，使其体内金属硫蛋白mRNA表白达到顶峰，在液氮中将其研磨成粉末后采取异硫氰酸胍法提取总RNA，再用Promega公司提供的小量分别mRNA试剂盒纯化mRNA。以此mRNA为摸板。根据已发表的果蝇以及其它生物的MT基因的保守序列，通过打算机同源检索比较，设计两个扩增引物，命名为引物1跟引物2，引物1的序列是：5’CAAGTGAATCATCTCAGTG（此处忽略..）C3’，引物2的序列是：5’TGTAGAGAGACAAGATGCAG3’。再利用反转录PCR技巧(OneStepRNART-PCRKit)直接一次性顺次合成cDNA第一链、cDNA第二链、DNA扩增。用回收试剂盒回收扩增产物，再将其克隆到pMD18-T质粒载体上，在转化平板上经过氨苄青霉素抗性及α-互补初步筛选，随机挑取4个白色菌落，进一步利用转化载体pMD18-T上插入片段两端的两个限度性内切酶位点EcoRⅠ跟HindⅢ进行双酶切鉴定，将获得的阳性克隆子再进行PCR鉴定。最后（此处忽略..）将经过鉴定筛选的两个阳性克隆子进行序列测定与分析。成果显示：扩增的cDNA片段长度为289bp，其中含有一个编码45个氨基酸的开放浏览框，浏览框所编码的氨基酸中含有10个半胱氨酸，且在序列中均排列成Cys-X-Cys，其中X为Ser、Val、His或Lys。这些特点阐明扩增的基因片段为家蝇MT基因序列的一部分。此基因序列片段与果蝇MTn基因序列的同源性达到85.0％，扩增的基因序列中含有三个内切酶位点BgⅡ、BamⅡⅠ跟BgⅠⅡ，这一点也跟果蝇MTn基因非常类似。这阐明MT基（本文此处忽略..）因存在保守性。推导的氨基酸序列组成分析成果显示：此MT分子量为5456.8Da。分子中半胱氨酸含量最高，达到22.2％，其次为赖氨酸(8.0％)跟丝氨酸(7.7％)。序列中还含有少量的芳香族氨基酸，如酪氨酸(3.3％)，苯丙氨酸(3.0％)跟组氨酸(2.8％)，这一点跟牡蛎MT类似，而不同于果蝇跟哺乳动物MT(不含有芳香族氨基酸跟组氨酸)。由扩增片段的编码序列所推导的家蝇MT与其它生物MT比较显示：家蝇MT氨基酸序列与果蝇(Drosophilamelanogaster)MTn氨基酸序列的同源性最高，达到65％；与部分无脊椎（文章此处忽略..）动物MT氨基酸序列的同源性在35％-41％的范畴内；与部分动物MT氨基酸序列的同源性比较成果为：同源性最高的为孢子动物墨角藻(Fucusvesiculosus)(51％)，而最低的为种子动物鼠耳芥(Arabidopsisthalianal)(35％)；与哺乳动物绿猴MT-Ⅱ的同源性达到41％，与人类MT-Ⅱ的同源性为35％。

以上为本篇毕业论文范文家蝇金属硫蛋白的cDNA克隆与序列测定的介绍部分。

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