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嗅鞘细胞对螺旋神经节细胞离体培养的影响及其机制的研究

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毕业论文范文题目:嗅鞘细胞对螺旋神经节细胞离体培养的影响及其机制的研究,论文范文关键词:嗅鞘细胞对螺旋神经节细胞离体培养的影响及其机制的研究
嗅鞘细胞对螺旋神经节细胞离体培养的影响及其机制的研究毕业论文范文介绍开始:
【论文摘要】:第一部分嗅鞘细胞的体外培养、纯化及鉴定目标:纯化培养跟鉴定成年大鼠嗅球嗅鞘细胞(olfactoryensheathingcellsOECs),为后续实验做好筹备。方法:取成年大鼠嗅球神经层,经酶消化的方法获得含有OECs的混淆细胞悬液,采取多次长时差速贴壁的方法纯化OECs,用含有10%FBS的DF12培养基培养,2d后培养基中参加bFGF(20ng/ml)跟forskolin(2uM)促进OECs的增殖,每隔3d半量调换培养基。倒置相差显微镜下察看OECs的成长状况,采取P75NTR跟GFAP细胞免疫组化的方法鉴定OECs,荧光显微镜下察看OECs的状况并统计其纯度。成果:采取多次长时差速贴壁的方法可能去除绝大部分的传染细胞,包含成纤维细胞跟星形胶质细胞,接种的OECs约24小时后贴壁,倒置相差显微镜下察看见大部分细胞胞体呈梭形、部分细胞胞体为多角形,伸出崛起(文章此处忽略..);细胞在接种培养的前2d成长迟缓,2d后培养基中参加bFGF(20ng/ml)跟forskolin(2uM)可见细胞增殖加快,细胞崛起苗条,培养7d后见OECs覆盖皿底的90%,构成—细胞单层。P75NTR跟GFAP染色见约92%的细胞为P75NTR(+),分布在崛起、胞体,其中胞核被深染;约12%的细胞为GFAP(+)。论断:采取多次长时差速贴壁的方法可能获得实验所需纯度的OECs,培养基(DF12+10%FBS)中参加bFGF(20ng/ml)跟forskolin(2uM)可能明显促进OECs的增殖。第二部分嗅鞘细胞对耳蜗螺旋神经节细胞离体培养的影响目标:摸索在离体实验中OECs有无促进耳蜗听觉传入神经元—螺旋神经节细胞(spiralganglioncellsSGCs)存活的作用。方法:取成年大鼠嗅球跟新生大鼠蜗轴组织块进行OECs与SGCs的培养,采取多次长时差速贴壁的方法纯化培养OECs。实验分OE(本文此处忽略..)Cs与SGCs共培养组、SGCs在OECs前提培养液中(OEC-CM)培养组跟SGCs单独培养组。倒置相差显微镜下察看OECs跟SGCs成长状况,P75NTR免疫组化法鉴定OECs,神经元特异性标记物βⅢ-tubulin标记SGCs。成果:OECs贴壁培养7天后构成—细胞单层,在OECs与SGCs共培养体系中,SGCs在OECs构成的细胞单层的名义成长,并伸出长崛起,浮现典范的双极神经元状况;在培养的前6d,跟着培养时光的延长,SGCs较接种前减少,但共培养组中SGCs存活数量明显高于SGCs单独培养组(P0.01);与SGCs在OEC-CM中培养比较,共培养组更能促进SGCs存活,并且单独培养组的SGCs数量在培养的第6d呈现大幅度减少;在培养的第9d,单独培养组中多少乎不SGCs成长;而在共培养组,SGCs的数量未见明显变更(P0.05);统计发明单独培(文章此处忽略..)养组中存活的SGCs由第3d的14.6±1.1SGCs/视线(×200)减少到第14d的3.3±0.3SGCs/视线;OEC-CM组中的SGCs由35.3±2.1SGCs/视线降落到12.9±0.3SGCs/视线;共培养组中存活的SGCs较其它组明显增多,由第3d的66.9±1.2SGCs/视线(×200)减少到第14d的38.9×1.0SGCs/视线。论断:OECs与SGCs共培养可能促进新生大鼠SGCs存活。第三部分嗅鞘细胞促进螺旋神经节细胞存活的分子机制目标:初步研究OECs促进SGCs体外存活的分子机制。方法:树破OECs与SGCs共培养体系,实验分三组:共培养+脑源性神经养分因子(BDNF,500pg/ml)组;共培养+BDNF抗体(IgY型,50ug/ml)组;对比组为OECs与SGCs共培养。共培养3d后固定,βⅢ-tubulin免疫组化染色鉴定SGCs,每个培养皿随机取4个视线,荧光显微镜下统计βⅢ-tubulin标(此处忽略..)记的SGCs,统计各培养组中的SGCs。成果:共培养+BDNF组中有大量SGCs在OECs构成的单层细胞毯名义成长,但与对比组比较,SCG的数量无统计学差别;参加BDNF抗体(IgY)的共培养组中的SGCs数量明显减少(P0.01)。论断:OECs与SGCs共培养中参加BDNF对SGCs存活无明显影响,而参加BDNF抗体(IgY)后存活的SGCs减少。OECs分泌BDNF可能是其促进SGCs体外培养的存活,发挥对SGCs的养分保护作用的分子机制之一。


以上为本篇毕业论文范文嗅鞘细胞对螺旋神经节细胞离体培养的影响及其机制的研究的介绍部分。
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