目       录

一、 摘要.........................................II前言（1）

  

1.  柴胡简介

1.1  柴胡形态（6）

1.2  柴胡的化学成分及其药理作用 （7）  

    

1.3  柴胡皂苷的要药理作用及其研究发现（8）

2.   柴胡中微量成分的分离作用及结构鉴定（13）

2.1  实验方法（13）

2.1.2  柴胡制剂中主要成分含量测定实例（13）

2.1.3 原料药中微量成分的分离（13） 

致谢（18）

一·摘要 

柴胡中柴胡皂苷a提取率的影响因素。方法：考察提取溶媒，提取时间，粉碎程度等对柴胡皂苷a提取率的影响。结果：提取溶媒的影响最大。结论：柴胡皂苷a结构中的氧环易断裂，但采用碱醇提取能抑止其断裂，提取率高。柴胡皂苷主治功能和解表里，疏肝，升阳。用于感冒发热，寒热往来，胸胁胀痛，月经不调，子官脱垂，脱肛。

关键词：柴胡 ；柴胡皂苷a； 提取； 分离 ；结构鉴定

前言（1）

柴胡为伞形科植物柴胡(Bupleurum chinense DC.)和狭叶柴胡(B.scorzonerifoliunz Willd.）干燥根，具有疏散退热，疏肝解郁，升阳举陷之功效。柴胡皂苷a、d被认为是柴胡的主要药效成分，对整个药物的疗效起着举足轻重的作用。所以，在含有柴胡制剂的工艺研究过程中，应该以柴胡皂苷的含量为指标，找出影响其提取率的主要因素，确保制剂疗效，提高药材的利用度。

柴胡皂苷a、d具有13，28－氧环的结构，氧环不稳定，在酸的作用下醚键可能会断裂生成人工产物异环或同环双烯结构。所以，在柴胡皂苷a、d在提取过程中，受植物体内酸性成分影响，转变为柴胡皂苷b1 `b2(1),又有人认为加热提取时间对皂角a的含量影响较大，水加热提取8h柴胡皂苷A已损贻尽（2），针对这些因素，对柴胡提取工艺进行考察。

1.柴胡简介

1.1柴胡形态（6）

多年生草本，高40-85cm。主根较粗大，坚硬。茎单一或数茎丛生，上部多回分枝，微作“之”字形曲折。叶互生；基生叶倒披针形或狂椭圆形，长4-7cm，宽6-8mm，先端渐尖，基部收缩成柄；茎生叶长圆状披针形，长4-12cm，宽6-18mm，有时达3cm，先端渐尖或急尖，有短芒尖头，基部收缩成叶鞘，抱茎，脉7-9，上面鲜绿色，下面淡绿色，常有白霜。复伞形花序多分枝，顶生或侧生，梗细，常水平伸出，形成疏松的圆锥状；总苞片2-3，或无，狭披针形，长1-5mm，宽0.5-1.2mm，很少1-5脉；伞辐3-8，纤细，不等长，长1-3cm；小总苞片5-7，披针形，长3-3.5mm，宽0.6-1mm，先端尖锐，3脉，向叶背凸出；小伞形花序有花5-10，花柄长约1.2mm，直径1.2-1.8mm；花瓣鲜黄色，上部内折，中肋隆起，小舌片半圆形，先端2浅裂；花柱基深黄色，宽于子房。双悬果广椭圆形，棕色，两侧略扁，长2.5-3mm，棱狭翼状，淡棕以，每棱槽中有油管3，很少4，合生面4。花期7-9月，果期9-11月。多年生草本，高30-60cm。主根发达，圆锥形，外皮红褐色，质疏松而稍脆。茎单一或数分枝，基部留有多数棕红色或黑棕以的叶柄残留纤维。叶细线形，长6-16cm，宽2-7mm，先端长渐尖，基部稍变窄，抱茎，质厚，稍硬挺，常对折或内卷，3-7脉，叶缘白色，骨质；上部叶小，同形。总苞片1-4，针形，极细小，1-3脉，常早落；小总苞片5；线状披针形，细而尖锐；小伞形色，棱浅褐色，粗钝略凸，每棱槽中有油管5-6，合生面4-6。花期7-9月，果期9-11月。

              

柴胡主要生于干燥草原，向阳山坡及灌林木缘等处。

1.2柴胡的化学成分及其药理作用 （7）

   1.柴胡根含挥发油0.15%，内有：戊酸（pentanoic acid)，已酸（hexanoic acid)，庚酸（heptanoic acid)，2-庚烯酸（2-heptenoic acid)，辛酸（octanoic acid)，2-辛烯酸（2-octenoic acid)，壬酸（nonanoic acid)，等等。

2.小柴胡 根含挥发油，内有：戊酸，2，6-二甲基辛烷，胡薄荷酮，α-松油醇，薄荷酮，芦藜醇（veratryl alcohol)，菖蒲二烯，广藿香烷，柏木烯醇（cedrennol)，α-桉叶醇（α-eudesmol)，十六酸[2]；又含柴胡总甙0.05%，其中柴胡皂甙a0.05%，柴胡皂甙c及d均微量[11]。

柴胡毒性很低，柴胡浸膏（10%）水溶液鼹鼠 皮下注射，其最小致死量为100mg/kg。小鼠1次腹腔注射北柴胡总挥发油的半数致死量为1.19±0.12g/kg，北柴胡总甙的半数致死量为1.906±0.21g/kg。另有报道，柴胡总皂甙小鼠口服的半数致死量为4.7g/kg，腹腔注射为0.112g/kg；豚鼠腹腔注射的半数致死量为0.583g/kg。本品所含白芷素大鼠腹腔注射的半数致死量为165mg/kg，小鼠为254mg/kg。[3]

1.3柴胡皂苷的要药理作用及其研究发现(8)

解热、抗内毒素、抗炎作用　研究发现,SS对大肠埃希菌、伤寒杆菌、副伤寒疫苗导致的感染性发热模型和酵母液导致的无菌性发热模型均有明显的解热作用,皂苷元对酵母液导致的无菌性发热模型均有明显的解热作用;而且还能使正常动物的体温降低,是否通过下丘脑体温调节中枢的体温调定点下移途径发挥体温降低作用目前尚未见报道[4]。

　　体内、外抗内毒素实验证明,SS具有非常明显的抗内毒素活性[5]。SS是柴胡抗炎的主要物质基础,对角叉菜胶、右旋糖酐、52羟色胺、巴豆油或醋酸所致大鼠足肿胀有明显抑制作用,作用特点表现在炎症早期毛细血管通透性增高、渗出、炎症介质释放、白细胞游走和晚期肉芽肿形成、结缔组织增生等多环节和过程都有抗炎作用[4]。因SSa、SSd有类甾环样结构,其抗炎机制与抑制炎性介质和内源性糖皮质激素释放密切相关[2],主要作用靶点或通路为[6]:①提高小鼠血清促肾上腺皮质激素(ACTH)和下丘脑促肾上腺皮质激素生成激素(CRF)mRNA水平,并呈剂量依赖性增高。②提高糖皮质激素受体亲和力,糖皮质激素作用增强。③SSa、SSd提高肾上腺脏器系数,且呈现剂量正相关作用。④SSd可上调糖皮质激素受体mRNA的表达。

2.2　抗病毒、调节免疫、抗肿瘤作用　SS和已感染乙肝病毒人肝细胞共培养发现SSc能显著减少培养介质中乙肝抗原(HBe Ag)浓度,抑制乙肝病毒DNA复制;SSd仅有细胞毒作用而不抑制乙肝病毒的增殖[7]。SSa、SSd和二次生成的SSb1、SSb2、SSb3、SSb4抗病毒机制与抑制细胞Na+2Ka+2ATP 酶,导致病毒细胞能量和水盐代谢障碍有关[8]。

　　SS对机体特异性和非特异性免疫功能具有多环节的调节作用,主要表现为腹腔注射SS可引起腹腔巨噬细胞聚集、激活并刺激T淋巴细胞和B淋巴细胞参与机体免疫调节。在体内外实验中已证实SS能提高巨噬细胞表面受体活性、改变细胞内超微结构而提高其活性。注射SSa、SSd可使BALB/C小鼠胸腺系数先增后减,增加Th/Ts比例和I L22水平以及血中I g A、I gG、I g M水平,尤以SSd活性较强,且呈剂量依赖性增加;作用机制为促进c2myc及P53mRNA表达、抑制bcl22mRNA表达,促进淋巴细胞凋亡,从而抑制细胞生长。另SS可促进脾细胞生长和功能,SSd可促进I L22生成及其受体表达,提高c2fos基因转录,说明SS d对免疫功能影响的作用与细胞因子生成途径有关[9]。但也有实验表明柴胡煎剂、SS对动物胸腺有抑制作用,致使机体免疫功能降低[2]。

SS抑瘤谱[10,11]为大鼠实验性肝癌、DE N诱发大鼠肝癌、C6大鼠神经胶质瘤、人胃腺癌细胞(M K21)、人肝癌细胞P LC/ PRF/5株、人肺癌细胞A549,其中以SSd、Ssa作用更加显著,主要是通过抗肿瘤细胞分子黏附、干扰肿瘤细胞S期DNA合成及蛋白质代谢、抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡等途径发挥抗肿瘤作用,其分子机制主要与下调肝癌组织C2myc和PC NA表达、抑制肿瘤细胞分子黏附、抑制细胞Na+2K+2ATP酶活性、诱导细胞凋亡并下调Bcl22表达、增加p53和p21/WAF1蛋白的表达、提高Fas及其mFas L(膜绑定Fas配体)、sFas L(可溶性Fas配体)两个配体表达[9]有关。

2.柴胡中微量成分的分离作用及结构鉴定（13）

2.1实验方法（13）

 柴胡皂苷d对照品：购于中国食品药品鉴定研究院；屈臣氏纯净水：乙腈（色谱纯，Fisher公司）；其他试剂为分析纯（甲醇、乙醇。氨水）。柴胡总皂苷的含量测定：1、检测波长紧密吸取200述柴胡皂d对照品溶液置于小试管中，加入100L的对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液（0.1%），水浴（70）反应10min，待自然冷却后，加入4.0mL磷酸，继续反应30min。根据“2005年版药典1部附录VA”规定在200~800nm范围内进行扫描。根基最大吸收，选择检测波长为536nm。2.供试品溶液的制备：同上。3.对照品溶液制备：精密称取适量柴胡皂d对照品，用甲醇配置成浓度为2.07mg/ml的对照品溶液。4.标准曲线制备：取上述柴胡皂苷d对照品溶液2.0,4.0,6.0,8.0,10ml置于10mL量瓶中，甲醇稀释并定容，要匀备用。同1，上述不同浓度溶液1mL进行反应测定（536nm）,以吸收值A为纵坐标，柴胡皂苷d的浓度c为横坐标，进行线性回归，得回归方程为：A=610-4C-0.072

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