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柴胡或含柴胡制剂中主要成分的含量测定方法概述(一)
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柴胡或含柴胡制剂中主要成分的含量测定方法概述(一)
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柴胡或含柴胡制剂中主要成分的含量测定方法概述(一)
柴胡或含柴胡制剂中主要成分的含量测定方法概述(一)毕业论文范文介绍开始:
一、柴胡的综述
(一)柴胡名称的由来
柴胡,别名地熏、茈胡、山菜、茹草、柴草、竹叶柴胡、铁苗柴胡、蚂蚱腿、山根菜、黑柴胡、山柴胡、红柴胡、细叶柴胡、硬柴胡、香柴胡等,首载于东汉《神农本草经》,列为上品。《吴普本草》又名茹草。《图经本草》始易其名为柴胡,指出:“今关陕江湖间近道皆有之,以银州为胜,二月生功,甚香,茎青紫,叶似竹叶稍紧,亦有似斜蒿,亦有似麦门冬叶而短者,七月开黄花”。《本草纲目》载:“柴胡生山中,嫩则可茹,老则采而为柴”。北地所产者,亦如前胡而软,今人谓之北柴胡是也,入药亦良。南土所产者不似前胡,正如蒿根,强研不堪使用。其苗有如韭叶者、竹叶者,以竹叶者为胜。其如邪蒿者最下也。“《本草经疏》记载,柴胡主心腹肠、胃中结气,饮食积聚,寒热邪气,推陈致新,除伤寒心下烦热。张仲景治伤寒,有大小柴胡汤”。故后人治寒热,以此为要药。
随着历史的变迁和植物新种的不断发现,柴胡药用品种在不同时期也发生了一定的变化,因此在应用品种和部位方面较为混乱,并对柴胡的研究带来极大不便,故于以正本清源。
(二)柴胡品种的来源
对于柴胡的品种,历代本草有所记载,唐《新修本草》记载:“柴胡,味苦,平、微寒、无毒。”“一名地熏,一名山菜,一名茹草,叶一名芸蒿,辛香可食。生洪农川谷及冤句,二月、八月采根,曝干。”“《博物志》云:芸蒿叶似邪蒿,春秋有白蒻,长四、五寸,食美可食,长安及河内并有之,此柴胡疗伤寒第一用。”
且此草,根紫色,今太常用茈胡是也。又以木代系,相承呼为茈胡,且检诸本草,无名此者。伤寒大小柴胡汤,最为痰气之要,若以芸蒿根为之,更作茨音,大谬矣。“
《本草纲目》载:“(颂日)今关陕、江湖间、近道皆有之,以银州者为胜。二月生苗甚香。茎青紫坚硬,微用细线。叶似竹叶而稍紧小,亦有似斜蒿者,亦有似麦门冬叶而短者。七月开黄花,根淡赤色,似前胡而强。生丹州者结青子,与他处者不类。其根似芦头,有赤毛如鼠尾,独窠长者好。”
(三)柴胡的主要化学成份
柴胡其成分主要含柴胡皂苷(saikosapoinsa、b、c、d四种),甾醇,挥发油(柴胡醇、丁香酚等),脂肪酸(油酸、亚麻油酸、棕榈酸、硬脂酸等)和多糖等。还含黄酮、多元醇、香豆素和微量元素等成份。大叶柴胡的根和茎中含有柴胡皂甙a、c、d、I,含量高达3.8%,并从中分离到4种多烯炔类化合物:柴胡毒素、柴胡酮醇、乙酰柴胡毒素和柴胡炔醇。这些化合物对光、热不稳定,易氧化。柴胡毒素和乙酰柴胡毒素有剧毒,它们的半数致死量分别为3.03毫克/千克,3.13毫克/千克。
二、柴胡皂苷的含量测定方法
柴胡皂苷的测定方法有很多,传统方法中大致有利用物理性质如泡沫指数法和皂苷指数法;化学测定法包括比色法、薄层色谱扫描法以及生物测定法-溶血指数法。此外还有DCCC分离比色法。现在许多新的技术也相继普遍应用于含量测定,如HPLC法、高效毛细管电泳法等。且已不局限于某一种技术的单独使用,而是两种或多种技术的配合使用,且在实践中取得了颇为满意的效果。
(一)薄层色谱法
该法主要是用特定波长的光照射在薄层板上,对薄层色谱有吸收紫外光或可见光的斑点或经照射能激发产生荧光的斑点进行扫描,将扫描得到的图谱及积分数据用于药品分析的鉴别、杂质检查、含量测定,其具有很多优点,如简单易学,适用广泛(可用于复杂成分分离,未知成分的分离、检测),多路控效应(可同时多个样品分离,灵敏度高,检测速度快),样品预处理简单,精度要求不高,且同一色板上可根据被分离化合物的性质选择不同显色剂或检测方法进行定性或定量,并可重复测定;但本法的缺点在于会受到各种因素的影响,如半点的原位定量,受铺板质量、点样技术、展开条件、显色等因素影响,而显色又有显色的均匀、灵敏、稳定等因素影响。柴胡皂苷a、d虽无紫外吸收,而经温和酸处理,C13与C28之间的醚键开裂定量地转变成二烯体柴胡皂苷(a、d分别转变成b1、b2),在紫外产生明显吸收峰,故可通过紫外检测转化后的二烯体柴胡皂苷含量,进而计算柴胡皂苷a、d的含量。目前许多学者已运用此法测定柴胡药材或柴胡制剂中柴胡皂苷的含量,并取得了良好的结果,另外,陈婷等还采用薄层色谱-分光光度法联用来测定柴胡疏肝散中柴胡皂苷a、d的含量。而瑞士CAMAG公司,已出产了铺板、点样、展开、拍照、成像、扫描的专门的自动化规范仪器,扫描仪用计算机控制,测量数据转换成数字处理,得到的色谱清晰稳定,有指纹鉴别意义,结果较为稳定和可靠。
(二)高效液相色谱法(HPLC)
该法利用高压泵加压,使载流体中各种溶质快速通过分离管,在短时间完成复杂的分析工作,有液-固相层析法、液液相层析法、分子筛层析法、离子交换层析法。2005年版《中国药典》中,用HPLC法的品种由2000年版105种上升至518种。通常以C18为分析柱,以醇水或甲醇/酸/水作流动相。本法有良好的重现性、可操作性,适用于对成分多样性、复杂性、分离难度大的中药检验。石瑞娜等以乙腈-水90∶10为流动相,流速为0.8mL/min,以208nm为检测波长,测定柴胡中柴胡皂苷a的含量。HPLC法还可与质谱联用(HPLC-MS)、HPLC-NMR等。HPLC-NMR适用于定量分析,常用检测器(紫外荧光)提供药物、代谢物结构信息有限,因此还需与有较强解析化合物结构能力的相关技术联用。
(三)高效毛细管电泳法(HPCE)
该法是指以弹性石英毛细管为分离通道,以高电压直流电场为驱动力,依据供试品中各组分的淌度(单位电场强度下的迁移速度)和(或)分配行为的差异而实现各组分分离的一种分析方法。近年来许多药学临床研究实验表明,使用高效毛细管电泳法(HPCE)来分析中草药和中药制剂取得很好的效果。目前国内主要应用区带毛细管电泳法(CZE)和胶束毛细管电泳法(MECC)对中药材中有效成分的不同类型及中药制剂含量进行测定。丁原菊等利用环糊精衍生物2-O丙酮基-2-0-羟丙基-环糊精(2-AHPβ-CD)作为手性选择剂,提出了一种毛细管电泳快速分离、测定柴胡中柴胡皂甙a、d对映体的方法。考察了手性选择剂浓度、缓冲液浓度及其pH值对分离效果的影响,确定了最佳分离条件。结果表明,在214nm检测波长处,在硼砂缓冲溶液中,2-AHPβ-CD能使柴胡皂甙a、d异构体在7min内得到分离。利用该法测定了柴胡中柴胡皂苷a、d的含量,并进一步研究了方法的线性范围、检测限及精密度。HPCE法以其高效、快速、简便且柱不易受污染而优于HPLC法,但仍存在重现性较差、线性范围窄和灵敏度较低等不足。重现性差主要是HPCE技术发展初期仪器本身缺陷及操作人员经验不足所致。目前各商品仪器经不断改进和完善,加上自动进样器的普遍使用,该缺点已基本得以克服,与常规HPLC法基本接近。灵敏度低主要受在柱检测方式及进样量少(1-50)的限制,往往比HPLC法低十到数十倍,但可通过在柱预浓缩如场放大堆积效应,或处理如固相萃取等技术加以改善。总之,HPCE作为一种高效、快速、简便的分离技术,将会在中药领域中发挥其更重要的作用。
三、HPLC法测定含柴胡制剂主要成分案例
(一)实例1
1)
液相色谱系统
色谱柱类型:kromasilC18或等同,尺寸:250mm×4.6mm,5μm
流动相:甲醇-水-磷酸(47:53:0.2)(V/V/V)
柱温:25℃
检测器:HPLCUV检测器
检测波长:315nm
流速:1.0ml/min
进样量:10μl
运行时间:60min
备注:DAD检测器,参比波长“关掉”。
2)溶液配制
供试品溶液:(室温条件下24h内稳定)
取本品装量差异项下的内容物,研细,取约0.3g,精密称定,置100ml量瓶中,加70%乙醇70ml,超声处理(功率250W,频率50kHz)30分钟,放冷,加70%乙醇稀释至刻度,摇匀,用0.45μmRC滤膜(NL滤膜)滤过,取续滤液,即得。
对照品溶液:(室温条件下32h内稳定)
精密称取黄芩苷对照品20mg,置500ml量瓶中,加70%乙醇适量使溶解,并用70%乙醇稀释至刻度。摇匀,即得。
备注:检测过程中需使用塑料进样小瓶。将对照品溶液分装至进样小瓶中时,根据序列中对照品溶液的进样针数倒取相应数量的进样小瓶,每瓶仅进样1针,避免同一瓶重复进样。
3) 系统适用性试验
通流动相直至系统稳定,进空白(70%乙醇),应无干扰峰。
连续进5针对照品溶液,第一针对照品溶液理论板数按黄芩苷计算应不低于2000;5针对照品溶液的主峰面积的RSD%应不大于2.0%。
4) 测定
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