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鸡感染性支气管炎病毒H120、W93、H52、M41疫苗株鸡胚肾细胞培养

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毕业论文范文题目:鸡感染性支气管炎病毒H120、W93、H52、M41疫苗株鸡胚肾细胞培养,论文范文关键词:鸡感染性支气管炎病毒H120、W93、H52、M41疫苗株鸡胚肾细胞培养
鸡感染性支气管炎病毒H120、W93、H52、M41疫苗株鸡胚肾细胞培养毕业论文范文介绍开始:
【论文摘要】:鸡感染性支气管炎(AvianInfectiousBronchitis,IB)是由冠状病毒属鸡感染性支气管炎病毒(AvianInfectiousBronchitisVirus,IBV)引起的一种急性、高度接触性感染病,给养禽业造成巨人的经济丧失。因为鸡感染性支气管炎病毒的宿主范畴窄,较难适应细胞培养,病毒重要利用鸡胚培养制备,而很少利用细胞培养方法。而且,目前对IBV在细胞上培养及其生物学特点方面的研究还比较少,因此,对IBV特别是疫苗株进行这方面的研究长短常必要的。本实验对IBV疫苗株在鸡胚肾(CEK)细胞长进行了培养及生物学特点鉴定,树破了鸡感染性支气管炎病毒荧光定量PCR(IBVFQ-PCR)疾速检测方法,用于病毒含量的疾速检测。首先,将IBVH120、W93、H52跟M41疫苗株在鸡胚肾(CEK)细胞、鸡胚成纤维(CEF)细胞、Vero细胞、增加TPCK胰酶培养的Vero细胞跟增加D-氨基葡萄糖培养的Vero细胞长进行了传代培养,经RT-PCR检测发明用CEK细胞培养IBV疫苗株成长后果最好。将H120、W93、H52跟M41株在CEK细胞上持续培养传代至25代,进行细胞毒致CEK细(略..)胞病变跟感染鸡胚病变的察看、血凝实验、病毒含量的测定、S1基因序列测定比对分析及血清学实验,研究IBV疫苗株CEK细胞毒的生物学特点。成果表明,IBV疫苗株CEK细胞毒可能引起CEK细胞圆缩、聚团,产生特异性细胞病变;病毒接种鸡胚后,感染鸡胚呈现失水、蜷缩、成长发育小等病变;只管经产气荚膜梭菌上清液处理,但IBV疫苗株细胞毒不表示血凝性;用EID50方法测定的细胞毒病毒含量比鸡胚尿囊液毒低约1个滴度;IBV细胞毒S1基因渐变与病毒含量变更有关,少数氨基酸的改变(即点渐变)可能引起毒力的改变。此外,在培养过程中发明,M41株在CEK细胞上传代至第3代即呈现细胞病变,适应性要比其余3株快;M41E11P18细胞毒病毒滴度最高,为106.87EID50/0.1mL,M41病毒滴度均匀值高于其余3个疫苗株细胞毒;在CEK细胞传代过程中,IBVH120跟H52株S1基因变异比W93株跟M41株活泼;用ELISA方法将雷同毒株细胞毒跟鸡胚尿囊液毒免疫鸡产生的抗体S/P值(大于0.2判为阳性)进行比较发明,H120细胞毒抗体S/P值在免疫后14天为-0.01,与鸡胚尿囊液毒雷同,在免疫后21、28天为0.153、0.282,略大于鸡胚尿囊液毒的0.071、0.216,而免疫后35天为(略..)0.31,小于后者的0.385;W93细胞毒的抗体S/P值在免疫后14、21、35天为-0.02、0.02、0.261,均小于鸡胚尿囊液毒的-0.001、0.039、0.37,而在免疫后28天,两者抗体值相等,均为0.141;H52细胞毒的抗体S/P值在免疫后14、21、35天为0.246、0.815、1.044,均低于鸡胚尿囊液毒的0.307、0.964、1.154,而在免疫后28天前者为1.269,略高于后者的1.128;免疫后14、21、28、35天,M41株细胞毒的抗体S/P值分辨为0.108、0.189、0.544、0.828,均高于鸡胚尿囊液毒-0.03、0.011、0.34、0.808抗体S/P值。通过上述成果发明,M41株病毒适应细胞较快,细胞毒的病毒含量高、遗传变异绝对牢固,免疫鸡产生的ELISA抗体均高于同期M41鸡胚尿囊液毒,显示了较好的细胞适应性跟免疫原性。本实验通过构建重组质粒作为定量标准品、优化反应体系、树破标准曲线,树破了鸡感染性支气管炎病毒荧光定量检测方法(IBVFQ-PCR),分析与鸡胚半数感染量(EID50)方法的相干性,并用该方法监测IBV疫苗株H120、W93、H52跟M41在鸡胚肾(CEK)细胞传代过程中病毒含量的变更,研究不同接毒量跟不同收毒时光细胞毒病毒含量的差别。成果表明,IBVFQ-PCR标准曲线相干联数为0.995;反复性实验的变异系数小于0.0805;可检测到初始模板中2.916×10拷(本文此处忽略..)贝/μL的病毒核酸,检测灵敏度为惯例PCR检测灵敏度的10倍;与其余禽源病毒如鸡新城疫病毒(NDV)、鸡感染性法氏囊炎病毒(IBDV)、网状内皮组织增生病毒(REV)、禽脑脊髓炎病毒(AEV)均无穿插反应;证明IBVFQ-PCR存在良好的牢固性、灵敏性跟特异性。通过对IBVFQ-PCR方法与EID50方法进行相干性分析,发明两种方法所得数据之间的相干联数为r=0.748,相干联数明显性测验(t测验)t值为4.653,大于t0.01(20-2)的3.922,阐明两者相干性极明显;同时树破两种方法检测病毒含量的平行关联并得到回归方程。利用该方法检测病毒在CEK细胞传代过程中病毒含量的变更,发明在CEK上传代过程(1-25代)中,CEK细胞毒的上风代次是第16-18代,病毒含量较高;研究IBVM41株CEK细胞毒不同接毒量跟收毒时光病毒含量差别发明,用病毒滴度为106.87EID50/0.1mL的M41(E11P18)细胞毒,接毒量为0.1mL,接毒后培养24-36h时,细胞毒病毒含量较高。综上,本实验成功将IBVH120、W93、H52、M41株在CEK细胞上培养适应,获得各代次细胞毒,断定了CEK细胞毒的血凝性、毒力、遗传变异特点及免疫原性等生物学特点,并证明M41株较其余3个疫苗株有(文章此处忽略..)较好的细胞适应性跟免疫原性,为今后IBV在细胞内的变异研究及今后细胞源疫苗的研发奠定基本。此外,成功树破了IBVFQ-PCR方法及与EID50方法的平行关联,用于传代过程中病毒含量变更的疾速监测及病毒的培养前提筛选研究等方面,有较高的实用价值。


以上为本篇毕业论文范文鸡感染性支气管炎病毒H120、W93、H52、M41疫苗株鸡胚肾细胞培养的介绍部分。
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