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柴胡或含柴胡制剂中主要成分的含量测定方法概述(二)
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柴胡或含柴胡制剂中主要成分的含量测定方法概述(二)
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柴胡或含柴胡制剂中主要成分的含量测定方法概述(二)
柴胡或含柴胡制剂中主要成分的含量测定方法概述(二)毕业论文范文介绍开始:
柴胡或含柴胡制剂中主要成分的含量测定方法概述
记录色谱图。
按下式计算。
含量=
其中:
AStd-1
=5针Std-1中黄芩苷峰面积的平均值;
ASpl
=样品溶液色谱图黄芩苷峰面积;
Wstd-1
=Std-1中黄芩苷对照品的浓度,mg/ml;
P
=黄芩苷对照品的纯度;
Wspl
=供试品粉末的称样量,用mg表示;
Wa
=10粒小柴胡胶囊的平均装量,用mg表示;
图3-1 供试品溶液典型图谱
用6针Std的黄芩苷色谱峰的平均值计算黄芩苷的残留量:
残留量(μg/100cm2)=
其中:
AStd
=6针Std中黄芩苷峰面积的平均值;
ASpl
=样品溶液色谱图中黄芩苷的峰面积;
WStd
=Std中黄芩苷对照品的称样量,用mg表示;
P
=黄芩苷对照品的纯度;
R
=擦试钢板的回收率为75.5%
淋洗液样品
用6针Std的黄芩苷色谱峰的平均值计算黄芩苷的残留量:
残留量(μg/ml)=
其中:
AStd
=6针Std中黄芩苷峰面积的平均值;
ASpl
=样品溶液色谱图中黄芩苷的峰面积;
WStd
=Std中黄芩苷对照品的称样量,用mg表示;
P
=黄芩苷对照品的纯度;
R
=淋洗的回收率为97.7%
(二) 实例2
1)色谱条件
大连伊利特C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-水37:63;流速:1ml/min;检测波长208nm;柱温:35℃;进样量20μl.
2)对照品溶液的制备
精密称取柴胡皂苷a对照品5.09mg,加甲醇溶解并定容至10ml,摇匀,配成0.509mg/ml对照品溶液,冷藏备用。
3)供试品溶液的制备
取上述浓缩液10ml减压蒸干,加20ml甲醇溶解残渣,过滤得滤液。再取2ml滤液至10ml容量瓶中,加甲醇定容,摇匀,冷藏备用。
4)线性范围考察
精密吸取对照品储备液2.0、6.0、10.0、14.0、18.0μl,在“2.4.1”项下色谱条件下进样测定,记录峰面积,以峰面积积分值Y为纵坐标,对照品溶液进样量X(μl)为横坐标,进行线性回归(n=5), 得线性回归方程为Y=209413.7X-162379.4,线性范围为:0.9720~ 9.635μg,相关系数为r=0.9997,线性关系良好。
5)精密度试验
精密吸取对照品20μl,在“2.4.1”项下色谱条件下重复进样5次测定,记录峰面积,RSD为1.5%(n=5),表明精密度良好。
6)稳定性试验
将供试品溶液在室温下贮存,在“2.4.1”项下色谱条件下,分别于0,2h,4h,6h,8h进样测定,记录峰面积,RSD为2.0%,表明样品在8h内稳定。
7)重现性试验
精密称取同一批样品5份,按供试品溶液处理方法制备样品溶液,在“2.4.1”项下色谱条件下重复进样测定5次,记录峰面积,RSD为2.1%(n=5)
8)样品测定
精密吸取20μl样品溶液,在“2.4.1”项下色谱条件下进样测定,记录峰面积,计算各样品中柴胡皂苷a的含量。
以柴胡蒸馏液中挥发油的吸收度和柴胡皂苷a的含量为检测指标,参照单因素试验结果,分别以药材浸渍温度、挥发油收集量、柴胡皂苷提取时间、柴胡皂苷提取溶剂料液比等主要因素及不同水平进行(L9(34)正交设计,筛选最佳工艺。正交试验因素和水平见表1
表1 正交试验因素及水平
因素
水平
因素
浸渍温度A
收集量B
提取时间C
料液比D
1
40℃
2倍
1h
5倍
2
60℃
4倍
2h
6倍
3
80℃
5倍
3h
8倍
(三)实例3
1)色谱条件
色谱柱:kromasil C18 柱(4.6mm× 250mm,5μm);流动相:乙腈-水(55:45);流速;1.0ml •min-1;柱温:35℃;检测波长:210nm;进样量 20μl。
2)供试品溶液制备
取本品剥去包衣,研细,精密 称取样品 2.0g,置 50ml 量瓶中,加 5%氨水-甲醇溶 液 25ml,润湿 15min,密闭,超声提取 1h,滤过,以 甲醇 10ml 分两次洗涤滤渣,合并滤液,置水浴上蒸 干,放冷,加适量甲醇溶解,移入 l0ml 量瓶内,定容 至刻度,摇,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,得供试品 溶液。
3)阴性供试品溶液制备
取处方中去除柴胡药材, 按照供试品溶液的配制方法,配制成阴性供试品溶液。
4)线性关系考察
分别精密量取对照品溶液1.0, 2.0,4.0,6.0,8.0ml,置10ml 量瓶中,加甲醇稀释 至刻度。分别精密吸取上述溶液 20μl 注入液相色谱 仪,按上述色谱条件测得峰面积。以柴胡皂苷a 的含 量 C(μg•ml-1)为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,绘 制标准曲线,得线性方程为:Y=5E+06x,相关系数 r=0.9997,柴胡皂苷 a 浓度在 24.28~194.24μg•ml-1 之间呈良好的线性关系。
5)精密度试验
精密吸取柴胡皂苷 a 对照品溶液 20μl,按上述色谱条件,平行测定 6次,记录峰面积。 结果 RSD 为 1.37%,说明其精密度良好。
6)重现性试验
取本品(071221)剥去包衣,研细, 取约 2g,共 6 份,按上述供试品制备法制备,分别按 上述色谱条件测定,记录峰面积,计算含量。结果 RSD 为 1.57%,说明其重现性良好。
7)稳定性试验
取同一供试品溶液,分别在 0,l, 3,5,8h分别进样 20μl,按上述色谱条件测定,记录 峰面积。计算 RSD 值为1.52%。结果表明,供试品溶液在 8h之内稳定。2.10 样品测定 取本品剥去包衣,研细,取约 2g,5 份,按上述供试品制备法制备。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl,注入液相色谱仪,按上述 色谱条件测定,记录峰面积,以外标法计算样品中柴 胡皂苷 a 的含量,结果见表 2。
四、总结
中药成分复杂,应综合考虑各有效成分的性质及其在制备过程中的变化,以保证制剂的质量和疗效。据文献资料,柴胡中含柴胡皂苷a大约在0.2 %~0.4 %,从本实验最佳工艺提取液中测得柴胡中柴胡皂苷a的含量为0.32 %,因此本工艺提取效果较好。至于挥发油的含量,各种文献所得结果不尽相同,甚至相差10倍以上,由于药材的原因,如药材部位、采收时间、产地等的影响难以衡量,因此本实验在不影响挥发油提取的前提下还兼顾了柴胡皂苷a的提取,从而为柴胡的提取提供可靠的依据和参照。本实验建立的测定柴胡中成药中柴胡皂苷含量及黄芩苷残留量的HPLC方法精密度高,重复性好,操作性强,具有一定的代表性,而且适合组方,剂型不同的多个以柴胡为君药的中成药中柴胡皂苷的含量测定。
参考文献
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[2]唐智芳. 锥叶柴胡化学成分和质量研究[D].北京中医药大学,2010.
[3]闵宇航. 中药柴胡、何首乌、连翘、枸杞子的质量标准提高研究[D].北京中医药大学,2014.
[4]马宁. 补中益气丸质量标准提高及其指纹图谱研究[D].甘肃中医学院,2014.
[5]祝婧,龚千锋,钟凌云,张金莲. 柴胡不同炮制品中柴胡皂苷a与柴胡皂苷d含量测定[A]. 中华中医药学会中药炮制分会、中国医药物资协会中药饮片及生产设备协同创新联盟、中国医药保健品进出口商会中药饮片分会.2014年全国中药炮制学术年会暨中药饮片创新发展论坛及协同创新联盟会议会议讲义[C].中华中医药学会中药炮制分会、中国医药物资协会中药饮片及生产设备协同创新联盟、中国医药保健品进出口商会中药饮片分会:,2014:1.
[6]魏晓萌. 锥叶柴胡化学成分及质量控制方法研究[D].北京中医药大学,2018.
[7]史国生,谢强胜,李启艳,王玉团. 柴银口服液质量标准研究[J]. 中国药品标准,2014,15(05):343-347.
[8]梁镇标. 柴胡属药用植物资源调查及基于代谢组学的质量评价研究[D].南方医科大学,2012.
[9]李英. 河北省北柴胡生态适宜性区划研究[D].河北医科大学,2017.
[10]曾晓璇. 鄂西北地区4种柴胡属植物分子鉴别及柴胡药材活性成分近红外定量方法研究[D].湖北中医药大学,2017.
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