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山楂中黄酮类化合物的测定方法概述 (3)(四)
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山楂中黄酮类化合物的测定方法概述 (3)(四)
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山楂中黄酮类化合物的测定方法概述 (3)(四)
山楂中黄酮类化合物的测定方法概述 (3)(四)毕业论文范文介绍开始:
山楂中黄酮类化合物的测定方法概述
图2-11 提取时间对得率的影响
(3)循环次数对总黄酮提取率的影响
根据试验中确定的单因素条件进行循环次数单因素试验,得出试验结果,如图2-12所示。
图2-12 循环次数对得率的影响
由图2-12可知,循环次数为2次时,提取率较1次有显著提高,高于2次,提取率变化不大,说明黄酮在循环两次后已经提取充分。
(4)乙醇浓度对总黄酮提取率的影响
根据单因素试验中确定的条件进行乙醇浓度单因素试验,得出试验结果,如图2-13所示。
由图2-13可知,随着乙醇浓度的增加,提取率有下降趋势,猜测是因为山楂黄酮中水溶性的苷类成分较多,在极性较大的溶剂中溶解度较高。乙醇浓度在50%左右,提取率趋于稳定。为使提取物成分全面,正交试验所选乙醇浓度为30%-70%。
图2-13 乙醇浓度对得率的影响
3.正交试验结果
通过单因素试验,确定了快速溶剂萃取法提取山楂中总黄酮正交试验所需要的各个因素分别为提取温度、提取时间、循环次数和乙醇浓度,而且确定了各个因素所需要的水平,具体见表2-5。
表2-5快速溶剂萃取法正交试验因素水平表
因素
水平
A
B
C
D
提取温度(℃)
提取时间 (min)
循环次数(次)
乙醇浓度(%)
1
60
5
1
30
2
80
7
2
50
3
100
9
3
70
根据图2-5所示的正交试验设计的因素水平表,做正交试验,计算出总黄酮的提取率,试验结果见表2-6。
从表2-6可以看出:在正交试验所选条件范围内,4个因素对于山楂黄酮提取率的影响程度不同,按照影响从大到小的顺序为:C(循环次数)>D(乙醇浓度)>A(提取温度)=B(提取时间),即循环次数对于山楂黄酮提取率的影响最大,其次为乙醇浓度,然后是提取温度和提取时间。正交试验得出快速溶剂萃取的最佳工艺组合为:A2BlC3D2,即提取温度80℃,提取时间5min,循环次数3次,乙醇浓度50%。
4.4. 验证性试验
为验证试验结果的可靠性,以最优工艺条件进行3次验证试验,提取率最高为4.99%,相对标准偏差为1.01%。
表2-6快速溶剂萃取法正交试验结果
序号
因素
提取率(%)
A(℃)
B(min)
C(次)
D(%)
1
1
1
1
1
3.70
2
1
2
2
2
3.63
3
1
3
3
3
3.86
4
2
1
2
3
3.70
5
2
2
3
1
4.29
6
2
3
1
2
3.76
7
3
1
3
2
4.33
8
3
2
1
3
2.84
9
3
3
2
1
3.64
K1
11.19
11.73
10.30
11.63
K2
11.75
10.76
10.97
11.72
K3
10.81
11.26
12.48
10.40
K1
3.73
3.91
3.43
3.88
K2
3.92
3.59
3.66
3.91
K3
3.60
3.75
4.16
3.47
R
0.32
0.32
0.73
0.44
最优水平
A2B1C3D2
主次顺序
C>D>A=B
2.3不同提取方法试验结果比较
提取山楂中总黄酮的方法有很多种,本试验详细优化了两种提取方法用以提取山楂中黄酮,得到了各个方法的最佳提取条件,比较结果见表2-7。
由表2-7可知,快速溶剂萃取法的山楂黄酮提取率比微波提取法高37.1%,10g样品所需有机溶剂仅为微波提取法的5%-15%,虽然微波提取方法所用时间较短,但是反应剧烈,易爆沸,难控制。综合考虑,快速溶剂萃取法提取时间短,提取效率高,是提取山楂总黄酮的最佳方法。
表2-7快速溶剂萃取法最优黄酮萃取条件与其他提取方法对比
技术名称
平均提取时间
平均溶剂用量(每10g样品)
提取率
微波辅助提取
1.5min
300ml
3.64%
快速溶剂萃取
15min
15-45ml
4.99%
.1结论
结论与创新点
本文以歪把红山楂作为试验材料,研究了山楂中黄酮类化合物的提取方法,
将黄酮提取物用硅胶柱纯化后,鉴定了其主要成分。
1.确定了山楂中黄酮类化合物的提取工艺
本试验利用微波提取法、超临界提取法和快速溶剂萃取法,对山楂中的黄
酮进行了提取,并优化了提取工艺,以总黄酮提取率为依据,对不同方法进行
了单因素试验,并在此基础上进行了正交试验设计,得出了三种方法的最优提
取条件。微波提取法:料液比1:30,乙醇浓度70%,提取时间1.5 rain,微波
功率320 W,此条件下黄酮提取率为3.64%。超临界提取法:提取温度45。C,
提取压强25 MPa,夹带剂用量为每10 g原料加入20础浓度为70%的乙醇,提
取时间90 rain,可得山楂黄酮3.80%。快速溶剂萃取法:提取温度80℃,提取
时间5 rain,循环次数3次,乙醇浓度50%,山楂黄酮提取率为4.99%。
通过比较筛选出了提取山楂中黄酮的最佳方法为快速溶剂萃取法,该提取
方法提取率高,条件温和,自动化程度高。
2.黄酮提取物的纯化
将山楂提取物用水分散后,分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,
并利用硅胶柱分离乙酸乙酯萃取物。
3.山楂提取物的成分分析
将纯化产物进行GC.MS和LC.MS检测。GC.MS检测出20种化合物,其
中11种化合物首次在山楂中发现;LC.MS方法1检测出43种化合物,其中24
种首次在山楂中发现。在新发现的化合物中有4种同时被GC.MS检测出;利用
LC.MS方法2,对其中有代表性的样品Fr.1和Ft.15进行分析,共检测出86种
物质,鉴定出12种黄酮成分,其中5种首次在山楂中发现,分别为毛蕊花苷、
新圣草苷、万寿菊素.葡萄糖醛酸苷、新枸橘苷、印度黄檀苷。
创新点
1.首次采用快速溶剂萃取法提取了山楂中黄酮类物质,优化了提取条件。
2.在山楂提取物中检测出138种化合物,其中36种首次在山楂中发现。
3.鉴定出12种黄酮成分,其中5种首次在山楂中检测出。分别为毛蕊花苷、
新圣草苷、万寿菊素.葡萄糖醛酸苷、新枸橘苷、印度黄檀苷。
4.3展望
当今社会环境污染加剧,生活压力增大,各种疾病的发病率越来越高,山楂
黄酮及其他功能成分对于人体心脑血管疾病等有着很好的治疗和预防效果。随
着中医热潮的兴起,以及人们对健康的重视,尤其近几年,新的提取方法和分
离技术的出现,使得研究人员对于提取更有效的药物成分和发现新的物质有了
更大的信心,也将掀起天然产物化学的一次次新的浪潮。下一步的研究内容为:
根据已经分析出的结果,将山楂提取物继续纯化、分离,得到单体,使用NMR
等波谱方法进行结构鉴定,验证分析结果。同时,研究每个单体生物活性,为
最终开发山楂的保健食品和药品奠定理论基础。
3.结论
微波提取法,在料液比、乙醇浓度、提取时间、微波功率单因素试验的基础上,分别选取了三个水平进行正交设计试验,优化了微波提取法提取山楂中总黄酮的提取工艺,得到最佳的提取条件为:料液比1:30,乙醇浓度70%,提取时间1.5min,微波功率320W,此条件下总黄酮的提取率为3.64%。
快速溶剂萃取技术应用于植物总黄酮分离提取,具有简单、快速、溶剂用量少等特点,但由于植物的差异和器官的不同,需要根据实际情况设置萃取参数,以便获得有实用价值的最佳萃取条件。本试验采用正交分析的方法得到快速溶剂萃取法提取山楂中总黄酮的最佳提取条件为:萃取温度80℃,萃取时间5min,循环次数3次,乙醇浓度50%。在此条件下的山楂总黄酮的提取率为4.99%。
在微波提取法中提取山楂中总黄酮单因素试验中,当达到一定的提取时间,继续延长时,黄酮的提取率会逐渐下降,其原因可能是在较高温度条件下随着时间的延长,导致黄酮成分被部分破坏,而且时间太长会破坏黄酮的品质。而快速溶剂萃取法最佳萃取温度为80℃,完成一次提取时间为5min,因萃取时间短,可保证萃取物热降解减少,从而提高萃取率,降低对黄酮结构和活性的影响。因此快速溶剂萃取法是提取山楂中总黄酮的最佳方法。
参考文献
[1]时岩鹏,丁杏苞.山楂化学成分的研究[J].中草药,2000,31(3):173-174.
[2]李义奎.中药药理学[M].北京:中国中医药出版社,1992:126-126.
[3]谢伟华,孙超,刘淑敏等.山楂黄酮对高脂血模型小鼠血脂及生脂基因转录表达的影响[J].中国中药杂志,2009,34(2):224-229.
【4】黑龙江医药科学2000年04期
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